论文摘要
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）在我国发病率高,临床疗效及预后均很不理想,近来针对肝细胞癌的免疫治疗受到瞩目。但是长期以来,人们未能在肝癌中发现适用于诱导保护性免疫应答的肿瘤抗原,因而阻碍了肝癌免疫治疗的进展。MAGE-A（melanoma antigen A）基因是首先从黑色素瘤中发现的一组肿瘤相关抗原,这类抗原在正常组织中除睾丸和胎盘外均不表达,但在某些恶性肿瘤高度特异性表达,同时经MHC-Ⅰ类分子递呈到细胞表面后,可为自体细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）识别,因而是一种CTL介导的特异性免疫治疗的理想靶分子。现已知MAGE-A基因家族成员达12个,各成员间的同源性较高。MAGE-A9 cDNA全长945bp,编码分子量约35Kd的蛋白产物。迄今未见关于MAGE-A9基因克隆表达及在肝细胞癌中定位的研究报道。本课题在参照国内外相关研究的基础上,设计并完成了以下研究内容: 1.从HCC组织中抽提总RNA,设计引物扩增MAGE-A9基因,经亚克隆、测序鉴定其序列,与GenBank数据库比对。 2.构建MAGE-A9基因的原核分泌表达系统,分离可溶性表达产物,鉴定并纯化目的蛋白。 3.制备抗MAGE-A9抗原的单克隆抗体。 4.观察MAGE-A9基因在HCC中的表达及定位。 研究方法 1.Trizol一步法提取肝细胞癌组织总RNA,RT-PCR扩增
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