柑橘慢衰病诊断与微生态治理

论文摘要

2005年10月至2008年3月期间,对福建省柑橘半穿刺线虫（Tylenchulussemipenetrans）的分布与危害进行了较为系统的调查。福建省重要柑橘产区福州、宁德、三明、漳州、泉州5个地区均有柑橘半穿刺线虫的分布。在所调查的67个柑橘园中,发病柑橘园50个,占总调查果园的74.6%,果园株发病率5.0%-100%。对柑橘半穿刺线虫的真菌区系进行了初步研究。从发生慢衰病的柑橘根系及根际土壤中分离真菌,共鉴定出6属8种,黄曲霉（Aspergillus flavus）、茄病镰孢（Fusarium solani）、淡紫拟青霉（Paecilomycs lilacinus）为优势种群,分别占所有分离物的23.8%、18.6%、12.8%。从柑橘半穿刺线虫雌虫上分离到食线虫真菌9属12种,其中以茄病镰孢、尖孢镰孢（F.oxysporum）、淡紫拟青霉为优势种群,分别占总分离物的36.6%、15.4%、9.76%。结果表明柑橘半穿刺线虫的侵染对菌根真菌幼套球囊霉（Glomus etunicatum）的生长具有抑制作用,幼套球囊菌的菌丝数量和泡囊数量明显减少。进行了生防菌剂的研制和应用研究。从分离到的11株淡紫拟青霉菌株中筛选获得产孢量大、几丁质酶活力高、寄生性强的菌株He-5。该菌株适宜生长温度为20℃～30℃,pH值为5～8,耐盐碱能力较强,经离体测定其对柑橘半穿刺线虫胚胎期卵的寄生率为83.33%。采用双相发酵工艺研制了淡紫拟青霉He-5生防菌剂。He-5菌株在液体发酵中能以微循环产孢方式产孢,在3%虾壳粉液体培养基培养96h产孢量达31.08×107个·mL-1;菌株几丁质酶活力在5～6d达到最高峰。以谷壳、麸皮为固体培养基,通过调控温、湿度,实现大量快速产孢,6～8d产孢量可达120亿个·g-1。收集获得的孢子粉含孢量达130亿个·g-1以上,萌发率高达89.86%。用He-5孢子粉配制成生防菌剂进行田间试验,结果表明He-5生防菌剂对柑橘半穿刺线虫具有良好防治作用,病株根际施用He-5生防菌剂后柑橘半穿刺线虫雌虫虫口密度下降44.90%。He-5施用后可以在柑橘根际定殖并形成优势种群,防治后10个月调查,土壤中He-5菌量维持在2.60×104cfu·g-1水平,改善根系微生态,促进柑橘根系健康。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 概述
• 1 柑橘半穿刺线虫的分布与为害
• 1.1 柑橘半穿刺线虫的分布
• 1.2 柑橘半穿刺线虫的寄主范围
• 1.3 柑橘半穿刺线虫的生物学特性
• 1.4 柑橘半穿刺线虫的为害症状
• 2 柑橘半穿刺线虫的防治措施
• 2.1 检疫措施
• 2.2 栽培管理
• 2.3 选用抗性砧木
• 2.4 化学防治
• 2.4.1 种前熏蒸
• 2.4.2 药剂防治
• 2.5 生物防治
• 3 本研究的目的与意义
• 4 本研究基本路线
• 第二章 柑橘慢衰病诊断与分布
• 1 材料与方法
• 1.1 调查地点
• 1.2 调查方法
• 1.3 线虫的分离、杀死与固定
• 1.4 线虫的鉴定
• 1.5 土壤中二龄幼虫的计数
• 2 结果与分析
• 2.1 柑橘半穿刺线虫的分布状况
• 2.2 柑橘半穿刺线虫的为害症状
• 2.2.1 柑橘半穿刺线虫的侵染状况
• 2.2.2 柑橘半穿刺线虫的为害
• 3 讨论
• 3.1 福建省柑橘慢衰病的分布调查
• 3.2 柑橘半穿刺线虫引起的柑橘急性凋萎症状
• 3.3 福建省柑橘黄化症的病因分析
• 第三章 柑橘半穿刺线虫的真菌区系
• 1 材料与方法
• 1.1 样品采集
• 1.2 培养基制备
• 1.3 柑橘根及根际土真菌分离培养技术
• 1.3.1 根部真菌的分离
• 1.3.2 根际土壤真菌分离
• 1.4 柑橘半穿刺线虫雌虫食线虫真菌分离
• 1.5 真菌的保存与鉴定
• 1.6 柑橘半穿刺线虫侵染的根系菌根真菌的观察
• 2 结果与分析
• 2.1 病根及根际土壤真菌的主要类群
• 2.2 柑橘根及根际土壤真菌种类的分离率
• 2.3 柑橘半穿刺线虫雌虫上分离的真菌种类
• 2.4 柑橘半穿刺线虫雌虫上食线虫真菌的区系分析
• 2.5 菌根真菌鉴定
• 2.6 柑橘半穿刺线虫与菌根真菌的关系分析
• 3 讨论
• 3.1 柑橘根及根际土壤真菌区系分析
• 3.2 柑橘半穿刺线虫雌虫拮抗真菌的种类及区系分析
• 3.3 柑橘半穿刺线虫与菌根真菌关系的研究
• 第四章 淡紫拟青霉生防菌剂研制与应用
• 1 材料与方法
• 1.1 生防菌的筛选
• 1.1.1 淡紫拟青霉菌株在不同培养基中的生长特性
• 1.1.1.1 供试菌株
• 1.1.1.2 供试培养基
• 1.1.1.3 生长速度的测定
• 1.1.1.4 生物量测定
• 1.1.2 蛋白酶明胶平板测定
• 1.1.2.1 明胶培养基的制备
• 1.1.2.2 明胶平板法
• 1.1.3 几丁质琼脂平板培养筛选
• 1.1.3.1 几丁质胶体制备
• 1.1.3.2 几丁质琼脂培养基
• 1.1.3.3 几丁质平板筛选
• 1.1.4 淡紫拟青霉菌株He-5对柑橘半穿刺线虫的寄生性测定
• 1.1.4.1 淡紫拟青霉孢子悬浮液的制备
• 1.1.4.2 柑橘半穿刺线虫卵的分离
• 1.1.4.3 对柑橘半穿刺线虫卵的侵染测定
• 1.2 淡紫拟青霉He-5的生物学特性
• 1.2.1 不同温度对He-5生长的影响
• 1.2.2 不同pH值对He-5生长的影响
• 1.2.3 耐盐性的测定
• 1.2.4 He-5几丁质酶活力测定
• 1.2.4.1 几丁质液体培养基
• 1.2.4.2 菌株液体培养
• 1.2.4.3 几丁质酶活力测定
• 1.2.5 不同C/N 比（摩尔比）培养基对He-5生长的影响
• 1.2.6.He-5在3种液体培养基发酵生长性状
• 1.2.6.1 供试培养基
• 1.2.6.2 培养方法
• 1.3 淡紫拟青霉He-5的双相发酵
• 1.3.1 培养基的制备
• 1.3.2 菌株He-5两相发酵方法
• 1.3.2.1 液体发酵
• 1.3.2.2 固体发酵
• 1.3.2.3 孢子粉的收获与指标测定
• 1.4 淡紫拟青霉He-5菌剂田间应用
• 1.4.1 供试菌株
• 1.4.2 施用方法及用量
• 1.4.3 菌株He-5在根际土壤中的定殖
• 1.4.4 菌株He-5对真菌群落结构的影响
• 1.4.5 菌株He-5与柑橘根际真菌的对峙实验
• 1.4.5.1 供试材料
• 1.4.5.2 实验方法
• 1.4.6 淡紫拟青霉He-5菌剂对柑橘半穿刺线虫的田间防治
• 1.4.6.1 淡紫拟青霉He-5菌剂对柑橘半穿刺线虫的防治效果
• 1.4.6.2 淡紫拟青霉He-5菌剂对柑橘半穿刺线虫雌虫及卵的寄生率
• 2 结果与分析
• 2.1 淡紫拟青霉菌株的筛选
• 2.1.1 淡紫拟青霉菌株在不同培养基中的生长特性
• 2.1.1.1 不同淡紫拟青霉菌株的生长速度
• 2.1.1.2 淡紫拟青霉菌株在不同培养基中的生长性状
• 2.1.1.3 不同淡紫拟青霉菌株的生物量
• 2.1.2 淡紫拟青霉的蛋白酶活力测定
• 2.1.3 几丁质琼脂平板培养筛选
• 2.1.4 淡紫拟青霉菌株He-5对柑橘半穿刺线虫卵的寄生性测定
• 2.2 He-5的生物学特性
• 2.2.1 不同温度对淡紫拟青霉He-5生长的影响
• 2.2.2 不同pH值对淡紫拟青霉He-5生长的影响
• 2.2.3 He-5耐盐性的测定
• 2.2.4 He-5几丁质酶活力测定
• 2.2.5 不同C/N比对淡紫拟青霉He-5产孢量的影响
• 2.2.6 淡紫拟青霉He-5在3种液体培养基发酵特性
• 2.3 He-5的双相发酵
• 2.3.1 液体发酵
• 2.3.2 固体发酵
• 2.3.2.1 固体发酵培养性状
• 2.3.2.2 淡紫拟青霉固体发酵的温度变化
• 2.3.2.3 He-5固体发酵的产孢量变化
• 2.3.3 孢子粉质量指标
• 2.4 淡紫拟青霉He-5菌剂的田间应用
• 2.4.1 He-5菌剂在田间根际的定殖情况
• 2.4.2 不同处理对土壤真菌群落结构的影响
• 2.4.2.1 不同处理对土壤真菌种群优势度的影响
• 2.4.2.2 不同处理土壤真菌群落的多样性
• 2.4.2.3 不同处理土壤真菌群落的均匀性
• 2.4.3 He-5菌株与柑橘根际真菌的对峙实验
• 2.4.4 He-5菌剂对柑橘半穿刺线虫的田间防治效果初步调查
• 3 讨论
• 3.1 淡紫拟青霉高效菌株的筛选
• 3.2 菌株He-5的生物学特性
• 3.3 He-5的双相发酵工艺体系
• 3.4 He-5生防菌剂对柑橘慢衰病根系真菌区系的影响
• 结语与讨论
• 1 柑橘慢衰病诊断为当前大面积柑橘黄化的病因提出了新的认识
• 2 柑橘半穿刺线虫的真菌区系为病害微生态治理提供了理论基础
• 3 首次探讨了柑橘半穿刺线虫与柑橘菌根真菌的关系
• 4 生防菌剂研制和应用
• 参考文献
• 附录
• 致谢