Jagged-1在树突状细胞介导T细胞诱导免疫耐受中的作用

2020-12-03阅读(234)

论文摘要

目的:探讨Jagged-1在树突状细胞（dendritic cells,DCs）介导T细胞诱导同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用及其机制。方法:建立体外诱导小鼠骨髓来源DCs的模型,显微镜下观察Jagged-1对重组粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）和白细胞介素4（rmIL-4）协同诱导的小鼠骨髓DCs形态学变化的影响;荧光标记单克隆抗体染色技术结合流式细胞仪检测Jagged-1对不同时间小鼠骨髓DCs分化标记CD11c及DCs成熟标记MHC-Ⅱ、CD86、CD80和CD40表达的影响;利用MTT法检测Jagged-1诱导的DCs、T细胞和DC-T细胞共培养体系中T细胞对同种异基因淋巴细胞增殖的影响;通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELISA检测经Jagged-1处理的DCs、T细胞和DC-T细胞共培养体系上清中白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素12（IL-12）、干扰素γ（IFN-γ）、转化生长因子β（TGF-β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平;建立同种异基因小鼠皮肤移植模型,磁珠分选Jagged-1介导DC-T细胞共培养体系中CD4+T细胞,输入受体小鼠,观察皮肤移植物存活时间和移植物病理变化,检测受体外周血中CD4+CD25+Treg的表达水平,小鼠混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应。结果:Jagged-1诱导的细胞具有典型成熟DCs的形态特征,培养第6d和12d时,Jagged-1组CD11c细胞平均荧光强度（MFI）均明显增高（P＜0.01与P＜0.05）;Jagged-1组CD80、CD40和MHC-Ⅱhigh表达细胞的阳性率明显高于对照组（P＜0.05）,且CD80和CD40的MFI也明显增高（P＜0.01与P＜0.05）,而CD86的MFI无明显变化（P＞0.05）;Jagged-1诱导的DCs、T细胞和DC-T细胞均不同程度抑制IFN-γ、IL-2、IL-12和TNF-α等Th1型细胞因子的表达,显著升高TGF-β、IL-6、IL-4或IL-10等Treg或Th2型细胞因子水平;在混合淋巴细胞反应（MLR）中,Jagged-1组DCs、T细胞和DC-T细胞共培养体系中T细胞刺激同种异基因淋巴细胞增殖反应性均显著降低（P＜0.01）,DAPT能在一定程度上逆转Jagged-1的作用;Jagged-1介导的DCs直接接触作用后的CD4+T细胞能延长同种异基因小鼠移植皮片存活时间,皮肤移植物平均存活38.6d,显著高于对照组和DAPT+Jagged-1组（P＜0.01）,Jagged-1处理组移植皮片内浸润的炎症细胞数量明显减少;在MLR中,Jagged-1处理组小鼠淋巴细胞对供体小鼠淋巴细胞呈现低反应性（P＜0.01）,且加入IL-2逆转效果不明显,而对第三方无关供体KM小鼠淋巴细胞表现强烈的增殖反应;Jagged-1处理组小鼠在迟发型超敏反应中也表现出显著的低反应性（P＜0.01）;Jagged-1组小鼠外周血CD4+CD25+Treg与对照组（P＜0.01）和DAPT+Jagged-1组（P＜0.05）有显著差异,DAPT能阻断Jagged-1上调CD4+CD25+Treg的作用。结论:Jagged-1能诱导骨髓来源DCs的分化和成熟;Jagged-1可以通过抑制IFN-γ、IL-12和TNF-α等Th1型细胞因子表达,促进IL-4、IL-10等的表达诱导外周T细胞向Th2细胞分化,同时诱导DCs促进T细胞向Th2型分化,并减弱DCs刺激淋巴细胞增殖能力;Jagged-1联合DCs处理的CD4+T细胞诱导小鼠获得供体抗原特异性的免疫耐受,与CD4+CD25+Treg数量相对升高,改变Th1/Th2细胞因子平衡极化有关,这些发现可能为临床移植耐受的诱导提供新的治疗靶点。

论文目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 动物

2 主要试剂

3 主要仪器

4 主要溶液配制

5 淋巴细胞的制备

+T细胞的分选'>6 T细胞和CD4⁺T细胞的分选

7 骨髓细胞的制备

8 骨髓源性DCs的诱导

9 DCs分化和成熟的检测

10 混合淋巴细胞反应

11 细胞因子检测

12 小鼠同种异基因皮肤移植模型的建立

13 皮肤移植小鼠的治疗

14 治疗效果的评价

15 观察皮肤移植物病理变化

16 移植后混合淋巴细胞反应与IL-2逆转实验

17 迟发型超敏反应

+CD25⁺Treg的测定'>18 CD4⁺CD25⁺Treg的测定

19 统计学方法

结果

1 Jagged-1对DCs分化的影响

2 Jagged-1对DCs成熟的影响

3 Jagged-1对DCs形态的影响

4 Jagged-1影响DCs分泌细胞因子

5 Jagged-1影响DCs刺激T细胞增殖

6 Jagged-1影响T细胞分泌细胞因子

7 Jagged-1影响T细胞刺激同种异基因淋巴细胞增殖

8 Jagged-1影响DC-T细胞共培养上清中细胞因子的表达

9 Jagged-1影响DC-T细胞共培养体系中T细胞刺激同种异基因淋巴细胞增殖

10 Jagged-1对小鼠移植皮片存活的影响

11 Jagged-1对小鼠移植皮片组织病理学的影响

12 Jagged-1对皮肤移植后混合淋巴细胞反应的影响

13 Jagged-1影响皮肤移植受体对供体淋巴细胞的迟发型超敏反应

+CD25⁺Treg的影响'>14 Jagged-1对皮肤移植小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Treg的影响

讨论

小结

参考文献

发表论文

致谢

英文缩略词表

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标签：树突状细胞论文; 细胞论文; 细胞因子论文; 皮肤移植论文; 小鼠论文;

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