论文摘要
背景与目的: 肿瘤是细胞分化、增殖和死亡机制发生异常的结果。DNA的损伤和基因结构的异常,以及由此造成的所谓癌基因和/或抑癌基因的表达和功能上的改变,是细胞恶性转化的前提。但并不是所有的损伤均导致基因突变,其原因就在于细胞内的DNA修复系统能够清除和修复DNA损伤。其中,碱基切除修复（BER）,是清除细胞内DNA损伤的主要途径,而DNA聚合酶β（DNA polymerase β,DNA pol β）又是BER过程的关键酶,主要修复自由基氧化或胞嘧啶和甲基胞嘧啶脱氨基等过程产生的DNA损伤,也能解决外源性因素如亚硝胺类产生的烷基化碱基,在DNA和RNA水平上进行损伤修复,因此能减少损伤导致的基因突变。为此,本研究构建了食管组织野生型DNA pol β与增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的真核表达载体,而且将此融合基因导入食管癌细胞EC9706中,使外源野生型的DNA pol β表达,观察转染后的细胞生物学特性的变化,间接的研究DNA pol β的损伤修复作用。 方法: 运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-pol β中扩增出野生型的DNA pol β基因开放阅读框序列,作为目的片段,T-A克隆至pGEM-T载体,再定向克隆至pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体,获得野生型的重组真核表达载体pEGFP-C3-pol β。重组质粒pEGFP-C3-pol β用限制性内切酶酶切鉴定,通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。将重组的野生型的pEGFP-C3-pol β经脂质体介导转
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标签：聚合酶论文; 增强型绿色荧光蛋白论文; 融合基因论文; 细胞定位论文; 生物学特性论文;