论文摘要
目的:通过建立检测HLA-A、-B非多态位点表达的逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,并结合CD4/CD8比值和免疫抑制剂（FK506）血药浓度,研究外周血淋巴细胞（PBL）HLA-I作为移植后免疫状态,尤其是早期排异反应评估指标的可行性。 方法:依据GenBank中人HLA-I cDNA序列,根据HLA-A基因外显子4、5中的保守序列自主设计、筛选引物,采用RT-PCR一步法扩增HLA-A mRNA。收集30例肾移植患者术前及术后3个月内的抗凝外周血（随访10例）,并设立正常对照61例,提取外周血淋巴细胞,RT-PCR扩增HLA-A mRNA,琼脂糖凝胶电泳结果采用Bandscan软件分析相对灰度值,半定量HLA-A的基因表达。同时参照文献合成HLA-B特异性引物,随机选择5例随访病人与20例正常对照,RT-PCR扩增HLA-B mRNA,以观察HLA-A与HLA-B测定符合率。并采用流式细胞术、酶联免疫吸附法（ELISA）连续监测术后CD4/CD8比值及FK506 血药浓度。 结果: 1.肾移植患者HLA-A mRNA阳性表达率为29%（20/70）,较正常对照表达（82%,50/61）明显降低（P<0.001）。10例连续监测患者中有2例在监测期间发生急性排斥反应,排斥期间患者的HLA-A表达升高。不同患者移植后同一时期HLA-A表达存在个体差异,与有无感染、排斥反应有关。 2.HLA-B mRNA在随访病例中表达明显低于正常对组（P<0.05）。与相应的HLA-A表达比较,二者具有一致性（P>0.05）。 3.随访移植患者的外周血T淋巴细胞亚群与正常对照间的差异具有显著性
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标签：人类白细胞抗原论文; 移植论文; 逆转录聚合酶链反应论文; 基因表达论文; 流式细胞术论文;