论文摘要
利用MDBK细胞增殖牛病毒性腹泻病毒（BVDV）HN-1株，经蔗糖密度梯度离心纯化后免疫BALB／c小鼠，然后应用淋巴细胞杂交瘤技术，将小鼠脾细胞与NS0骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA筛选和有限稀释法克隆，最终得到4株能分泌抗BVDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株：3A8、3C7、3C11、3E9。经鉴定，3A8、3C7、3E9株分泌的单克隆抗体为IgG1亚类，3C11株为IgG2a亚类。3A8、3C7、3E9、3C11株分泌的单克隆抗体与牛冠状病毒（BCV）、牛轮状病毒（BRV）均无交叉反应，3A8、3C7、3E9株分泌的单克隆抗体与猪瘟病毒（HCV）、绵羊边界病毒（BDV）有交叉反应；3C11株分泌的单克隆抗体不与HCV和BDV发生交叉反应，显示出较好的特异性。杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的FLISA效价分别为1：1000和1：200000。连续培养20代后能稳定分泌抗体。这些单克隆抗体的获得为BVD的研究及诊断方法的建立奠定了良好的基础。用特异性较好的杂交瘤细胞3C11株分泌的单克隆抗体和兔抗BVDV IgG建立了检测BVDV的单克隆抗体双夹心ELISA。该方法与病毒分离试验对比，阳性符合率为86．67％，阴性符合率为100％；与中和试验对比，阳性符合率为93．33％，阴性符合率为100％。该方法最低病毒检出量为200 ng／mL。用该方法与商品化ELISA试剂盒同时检测牛全血100份，二者阳性检出符合率为96．15％。应用该方法对河南省南阳、周口、安阳3市肉牛场的562头份牛全血进行了检测，结果表明，牛群BVDV的感染率为16．75％。该方法具有良好的特异性、敏感性及稳定性，能够较好地用于BVDV的监测，从而为牛群中BVDV的检疫净化提供了可靠的手段，显示了良好的应用前景。
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标签：牛病毒性腹泻论文; 牛病毒性腹泻病毒论文; 单克隆抗体论文; 双夹心论文; 应用论文;