胚胎干细胞向内皮细胞的分化及PECAM-1在胚胎干细胞分化过程中的表达规律研究

论文题目: 胚胎干细胞向内皮细胞的分化及PECAM-1在胚胎干细胞分化过程中的表达规律研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科学

作者: 李宗金

导师: 韩忠朝

关键词: 胚胎干细胞,血管新生,血管生成,内皮细胞,分化,血小板内皮细胞黏附分子,剪接体

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 胚胎干细胞(embryonic stem cells，ES cells)是一类具有自我更新和发育全能性的早期胚胎细胞，本研究通过诱导小鼠ES细胞体外分化，建立了ES细胞体外血管生成和血管新生的序惯性模型，为研究血管形成的体内过程与血管形成有关的基因功能，评价血管形成促进和抑制因子提供了一个有用的工具；同时研究了血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1／CD31)在ES细胞的表达规律，探讨了PECAM-1在ES细胞分化过程中的作用。 第一部分 (1) 体外培养ES细胞诱导形成胚胎小体(embryoid body，EB)，将11d的EB种植到胶原中诱发出芽性血管新生；通过免疫组织化学染色方法检测EB及其出芽向内皮细胞和功能血管的分化；(2) 通过悬滴培养的方法，将培养6d的EB在全反式维甲酸(All-trans retinoic acid，ATRA)的作用下向神经细胞诱导分化；(3) 将培养11d的EB消化成单个细胞后，种植到甲基纤维素中，向造血细胞诱导分化。结果显示，ES细胞在体外能自发形成EB，其内部含有血管样结构，并伴有平滑肌的分化；种植到胶原中的胚胎小体能再现出芽性血管新生(sprouting angiogenesis)；ES细胞在体外同时也能分化成神经和造血细胞。 第二部分 体外培养ES细胞，保持其未分化状态，利用免疫组织化学、流式细胞术、RT-PCR等方法检测ES细胞未分化标志SSEA-1、碱性磷酸酶、Oct-4及PECAM-1的表达情况，同时，用流式细胞仪检测PECAM-1与其他内皮细胞标志表达的关系。应用克隆分析的方法检测不同剪接体的表达分布。体外培养ES细胞，保持其未分化状态，同时在细胞因子的作用下诱导形成胚胎小体(EB)；然后将EB种植到胶原中，在细胞因子的作用下诱导出芽性血管新生。分别利用免疫组织化学、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法检测ES细胞及其分化过程中PECAM-1、Oct-4及SSEA-1的表达。应用克隆分析的方法检测不同的PECAM-1剪接体在EB形成和出芽性血管新生过程中的表达分布。结果显示未分化的ES细胞表达较高水平的PECAM-1，表达8种PECAM-1的剪接体，包括全长、△12、△14、△15、△12&14、△12&15、△14&15、△12&14&15，其中△15和△14&15表达水平最高。

论文目录:

英文缩写

材料

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 ES细胞的体外血管形成和向其它细胞的分化

第二部分 PECAM-1的剪接体在ES细胞向内皮细胞分化过程中表达的研究

第三部分 PECAM-1在EB中的组织学表达模式

第四部分 PECAM-1在保持ES细胞全能性中的作用

结论

综述

胚胎干细胞的自我更新

血管形成的研究模型

在学期间发表的论文

致谢

发布时间: 2006-10-13

参考文献

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