染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠肠道微生物区系的影响

论文摘要

近年来,食物过敏呈现上升趋势。食物过敏与肠道微生物的紊乱有关,但是食物过敏导致哪些微生物变化?微生物在食物过敏中起到什么作用?目前相关报道并不多见。由于断绝食物过敏原比较困难,益生元以作为一种新型疗法引入到食物过敏的预防和治疗。染料木素作为一种植物雌激素对人类有多种益处。为阐明食物过敏性腹泻与微生物之间的关系,染料木素是否能改善食物过敏性腹泻,以及染料木素改善食物过敏腹泻的微生物学机制。本研究采用PCR/DGGE和real-time PCR分子技术,从粪样、结肠内容物和结肠粘膜三部分研究染料木素对卵清蛋白诱导腹泻小鼠微生物区系的影响。一染料木素对卵清蛋白诱导雌性BALB/c小鼠过敏性腹泻的影响试验采用32只清洁级雌性BALB/c小鼠随机分为阴性对照组（N）、阳性对照组（P）、低剂量染料木素组（L）和高剂量染料木素组（H）四组,每组8只小鼠,N组和P组饲喂无豆日粮,L组和H组饲喂在无豆日粮基础上分别添加10mg/kg和100mg/kg染料木素的日粮,经过腹腔注射致敏和OVA灌胃攻毒,成功建立了过敏性腹泻模型。小鼠在2、15和33天平均采食量明显下降,经过校正,低剂量染料木素组实际摄入量（mg/kg BW）为1.22,高剂量染料木素组实际摄入量为12.19。小鼠在32天开始出现腹泻,从32天到38天各组腹泻小鼠数量开始增加,并且小鼠平均体重有下降趋势。小鼠38天腹泻情况为：N组没有出现腹泻,P组和H组腹泻严重,L组腹泻减轻。二染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠粪样微生物区系的影响本实验选取不同天数小鼠粪样,利用PCR/DGGE技术研究了染料木素对OVA诱导腹泻小鼠粪样微生物区系的影响。DGGE分析显示：28天小鼠粪样微生物各个组别没有差异；38天低染料木素组出现一条特异性条带；稀粪样微生物区系多样性明显降低,H组特异条带与梭菌属相似性高,可能和H组腹泻有关；全程DGGE图谱显示：同组中不同天数小鼠粪样微生物区系相似,稀粪样微生物区系多样性明显降低,高染料木素组条带6出现,条带7消失。结果显示：致敏对小鼠粪样微生物区系没有影响；稀粪样微生物多样性显著降低；染料木素可以诱导某些菌群的富集,可能与腹泻相关。三染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠结肠内容物微生物菌群的影响本实验研究染料木素对第38天OVA诱导腹泻小鼠结肠微生物菌群的影响,DGGE和Real-time PCR分析结肠内容物细菌菌群。DGGE分析显示：与N组相比,P组多样性显著降低,同组（P组和L组）内,正常和腹泻小鼠样品间稍有差异,但是其相似性高于组间相似性。定量结果表明：相比于N组,P组、L组和H组总菌的拷贝数增加,双歧杆菌的拷贝数显著降低,梭菌Ⅳ群和大肠杆菌的拷贝数没有发生显著变化；相比于N组和L组,P组乳酸杆菌拷贝数显著下降,H组下降但不显著；相比于L组,H组拟杆菌拷贝数显著增加。结论：腹泻小鼠结肠菌群多样性降低,乳酸杆菌和双歧杆菌拷贝数降低；OVA致敏诱导使小鼠总菌拷贝数增加,双歧杆菌减少；低染料木素组可减轻腹泻,相比于腹泻组别小鼠（P组和H组）,乳酸杆菌拷贝数增加,染料木素缓解腹泻的作用可能与其增加乳酸杆菌的拷贝数有关。四染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠结肠粘膜微生物菌群的影响本实验研究染料木素对第38天OVA诱导腹泻小鼠结肠粘膜微生物菌群的影响,以DGGE和Real-time PCR技术分析结肠粘膜细菌菌群。DGGE分析显示：组别之间出现条带差异,相似性分析不同组别分布在不同的簇。定量结果表明：各组别间总菌的拷贝数和拟杆菌的拷贝数差异不显著,但是相对于N组,P组、L组和H组拟杆菌占总菌比例都增加,P组有增高趋势,H组增加极显著；相对于N组,L组的乳酸杆菌拷贝数显著增高,P组拷贝数有升高趋势；相对于N组和L组,P组和H组大肠杆菌的拷贝数降低,P组和L组差异显著。结论：相比于N组和L组,腹泻小鼠（P组和H组）拟杆菌占总菌的比例增加,大肠杆菌拷贝数减少；OVA致敏诱导使小鼠结肠粘膜乳酸杆菌的拷贝数增加。低染料木素组可减轻腹泻,相比于N组,低染料木素组（L）粘膜乳酸杆菌拷贝数显著增加,减缓腹泻的作用可能与其增加乳酸杆菌的拷贝数有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略符号
• 引言
• 文献综述
• 1 人和鼠肠道微生态
• 1.1 胃肠道解剖和生理功能
• 1.2 肠道微生物菌群多样性
• 1.3 肠道微生物与宿主之间的关系
• 2 食物过敏
• 2.1 食物过敏的定义和临床症状
• 2.1.1 食物过敏的定义
• 2.1.2 食物过敏的临床症状
• 2.2 食物过敏与肠道微生物
• 2.3 食物过敏的新治疗方法
• 2.4 过敏性腹泻
• 3 大豆异黄酮
• 3.1 大豆异黄酮概述
• 3.1.1 大豆异黄酮的种类和化学结构
• 3.1.2 已经发现的生理作用
• 3.1.3 大豆异黄酮对人类保健作用
• 3.2 大豆异黄酮在畜牧生产中的应用
• 3.3 大豆异黄酮和肠道微生物的关系
• 3.3.1 大豆异黄酮的吸收和代谢
• 3.3.2 肠道大豆异黄酮降解菌菌株的筛选情况
• 3.3.3 大豆异黄酮对肠道微生物的影响
• 4 分子生物学手段研究肠道微生物
• 4.1 16S rRNA基因克隆文库
• 4.2 DGGE指纹技术
• 4.3 16S rRNA基因定量技术
• 4.3.1 Real-time PCR原理
• 5 本研究的目的和研究内容
• 5.1 食物过敏与肠道菌群研究存在的问题
• 5.2 实验的研究目的
• 5.3 实验的研究内容
• 第一章 染料木素对卵清蛋白诱导雌性BALB/c小鼠过敏性腹泻的影响
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 主要试剂和仪器
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 试验设计
• 1.2.2 日粮配制与GEN实际摄入量的校正
• 1.2.3 动物饲养与管理
• 1.2.4 样品采集与保存
• 1.2.5 小鼠的腹泻判断标准
• 1.2.6 腹泻观察
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 小鼠体重和采食量的变化
• 2.2 小鼠腹泻状况
• 3 讨论
• ABSTRACT
• 第二章 染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠粪样微生物区系的影响
• 摘要
• 1 材料和方法
• 1.1 试剂和仪器
• 1.2 试验设计和样品采集
• 1.3 总细菌DNA的提取
• 1.4 肠道总细菌16S rRNA基因片段的扩增
• 1.5 DGGE及图谱分析
• 1.6 特殊条带的序列测定和分析
• 1.7 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 28天粪样微生物区系变化
• 2.2 38天粪样微生物区系变化
• 2.3 正常粪样和稀粪样微生物区系变化
• 2.4 全程粪样微生物区系变化
• 3 讨论
• ABSTRACT
• 第三章 染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠结肠内容物微生物菌群的影响
• 摘要
• 1 材料和方法
• 1.1 试剂和仪器
• 1.2 试验设计和样品采集
• 1.3 DNA的提取和PCR扩增
• 1.4 DGGE及图谱分析
• 1.5 特殊条带的序列测定和分析
• 1.6 Real-time PCR
• 1.7 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 结肠内容物总菌DGGE分析
• 2.2 同组内健康和腹泻小鼠总菌DGGE分析
• 2.3 Real-time PCR定量结肠内容物菌群
• 3 讨论
• ABSTRACT
• 第四章 染料木素对卵清蛋白诱导过敏性腹泻小鼠结肠粘膜微生物菌群的影响
• 摘要
• 1 材料和方法
• 1.1 试剂和仪器
• 1.2 试验设计和样品采集
• 1.3 DNA的提取和PCR扩增
• 1.4 DGGE及图谱分析
• 1.5 特殊条带的序列测定和分析
• 1.6 Real-time PCR
• 1.7 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 结肠粘膜总菌DGGE分析
• 2.2 Real-time PCR定量结肠粘膜菌群
• 3 讨论
• ABSTRACT
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录