豚鼠神经干细胞体外分化毛细胞样细胞及耳蜗移植的实验研究

论文摘要

第一部分豚鼠神经干细胞的分离、培养、鉴定目的建立豚鼠神经干细胞体外培养的模型,为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋创造基础。方法取刚出生的豚鼠靠近海马区的脑组织,体外于无Ca、Mg的D-Hank‘s溶液中进行分离,单细胞悬液置于含有20% B27、20ng/ml EGF、20ng/ml bFGF的培养基中悬浮培养。用Nestin免疫细胞化学法及免疫荧光鉴定神经干细胞,传代培养。结果所取的胎鼠细胞组织细胞可形成集落样生长的神经干细胞团,Nestin免疫细胞化学染色阳性,但是不表达Brn-3c和myosinⅦa。结论小鼠的神经干细胞可经体外分离纯化,建立细胞系,具有明显的增殖能力可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的供体细胞。第二部分豚鼠神经干细胞体外诱导分化毛细胞样细胞目的体外诱导豚鼠神经干细胞向毛细胞样细胞分化,初步探讨神经干细胞移植治疗感音神经性聋的可行性。方法取纯化的豚鼠神经干细胞,置于含有20% B27、20ng/ml EGF、20ng/ml bFGF、TGF-α、IGF-Ⅰ、10% FBS的DMEM/F12培养基中贴壁培养,四周后,免疫组化鉴定毛细胞特异表型myosinⅦa,pan-cytokeratin。结果培养细胞经免疫组化鉴定表达出毛细胞的特异性标记抗体myosinⅦa,pan-cytokeratin。结论神经干细胞可经体外分离纯化向毛细胞分化,并表现出毛细胞的特异性表型,这可能为神经干细胞移植治疗感音神经性聋提供基础。第三部分神经干细胞噪音性聋豚鼠内耳移植初步观察目的:研究神经干细胞（Neural stem cells, NSC）移植入豚鼠耳内存活以及迁移情况。方法豚鼠用白噪声制成神经性耳聋模型,取原代培养的神经干细胞,用Hoechst33342进行荧光素标记,在豚鼠内耳损伤后即刻移植入损伤耳内,移植后7～10天处死豚鼠,观察细胞标记荧光情况。处死前分别行ABR及40Hz诱发电位检测。结果神经干细胞在豚鼠的内耳中可以存活并沿着注射部位的骨壁生长结论神经干细胞移植入噪声性耳聋豚鼠的耳内可存活,并沿着注射的部位向上迁移生长,为进一步研究神经干细胞在体内的分化和表达奠定了基础。

论文目录

• 英文缩略词表
• 第一部分 豚鼠神经干细胞的分离、培养、鉴定
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4. 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 第二部分 豚鼠神经干细胞体外诱导分化毛细胞样细胞
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论与结论
• 参考文献
• 第三部分 神经干细胞噪音性聋豚鼠内耳移植初步观察
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献