MARVELD1基因在乳腺细胞系的表达及表遗传学调控研究

论文摘要

癌症已成为严重威胁人类健康的重大疾病之一,癌基因、抑癌基因和其他肿瘤相关基因的表遗传调控在癌症的发生发展过程中起到了至关重要的作用。MARVELD1基因是本实验室前期在探讨癌症发生及转移的分子机制过程中获得的一个新的候选抑癌基因,该基因定位于人类10号染色体长臂2区4带2亚带（10q24.2）。前期研究发现MARVELD1基因在多种正常组织中表达,肿瘤表达芯片结果分析表明在乳腺癌、肺癌、肾癌等多种癌症中MARVELD1基因的表达呈明显下调。实时定量结果显示60%的乳腺癌病例中MARVELD1基因的表达下调。为了进一步研究MARVELD1基因在人乳腺癌细胞系中的表达情况以及其表遗传学调控机制,我们利用实时定量PCR对11种乳腺癌细胞系中内源性MARVELD1的表达进行了分析,并以乳腺非致瘤细胞系MCF10A为对照,结果发现乳腺癌细胞系SK-BR-3中MARVELD1的表达显著低于非致瘤的上皮细胞系MCF10A。在此基础上,利用1.0μM和5.0μM去甲基化诱导剂5-Aza-CdR处理SK-BR-3 24h和48h后,实时定量PCR和蛋白质杂交实验检测MARVELD1的表达,结果显示经5-Aza-CdR处理后,MARVELD1基因表达显著升高,表明启动子的甲基化修饰是MARVELD1基因表达调控的主要方式。此外,利用100μg/ml去乙酰化酶抑制剂TSA与5-Aza-CdR联合处理SK-BR-3后,MARVELD1基因表达在RNA水平和蛋白质水平均发生变化,表明乙酰化对MARVELD1基因表达调控起到一定的作用。本研究结果表明在乳腺癌细胞系中MARVELD1的表达存在显著差异,其可能受到启动子区的甲基化和组蛋白乙酰化的调控。本研究将有助于全面认识MARVELD1的功能,并将为阐明MARVELD1的表遗传调控机制和MARVELD1基因的抑癌机制提供一定的理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 课题研究背景
• 1.2 国内外在该方向的研究现状与分析
• 1.2.1 乳腺癌简述
• 1.2.2 MARVELD1 的研究现状
• 1.2.3 表观遗传学研究进展
• 1.2.4 DNA甲基化
• 1.2.5 组蛋白乙酰化
• 1.3 本课题的研究的目的和意义
• 1.4 技术路线
• 第2章 实验材料与实验方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 细胞系
• 2.1.2 引物
• 2.1.3 抗体
• 2.1.4 各类其他实验试剂
• 2.1.5 常用缓冲液及其他相关试剂的配制
• 2.1.6 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 5-Aza-CdR处理
• 2.2.3 去乙酰化酶抑制剂TSA处理
• 2.2.4 RNA提取
• 2.2.5 逆转录RT-PCR方法扩增mRNA
• 2.2.6 标准品的制备
• 2.2.7 实时定量PCR
• 2.2.8 蛋白质杂交实验
• 2.3 本章小结
• 第3章 MARVELD1 基因在乳腺癌 细胞系的表达分析
• 3.1 引言
• 3.2 MARVELD1 基因在乳腺癌细胞系的表达分析
• 3.2.1 乳腺细胞系RNA的定性和定量分析
• 3.2.2 细胞系RNA逆转录及MARVELD1 表达的定量PCR分析
• 3.3 讨论
• 3.4 本章小结
• 第4章 MARVELD1 基因在乳腺癌细胞系SK-BR-3 中的表遗传学调控分析
• 4.1 引言
• 4.2 5-Aza-CdR处理后MARVELD1 在SK-BR-3 中的表达分析
• 4.2.1 5-Aza-CdR处理后SK-BR-3 细胞RNA的定性和定量分析
• 4.2.2 5-Aza-CdR处理SK-BR-3 后MARVELD1 的RNA表达变化
• 4.2.3 5-Aza-CdR处理SK-BR-3 后MARVELD1 的蛋白质表达变化
• 4.3 5-Aza-CdR和TSA联合处理后MARVELD1 的表达分析
• 4.3.1 5-Aza-CdR和TSA联合处理后RNA的定性和定量分析
• 4.3.2 5-Aza-CdR和TSA联合处理后MARVELD1 的RNA表达变化
• 4.3.3 5-Aza-CdR和TSA联合处理后MARVELD1 的蛋白质表达变化
• 4.4 讨论
• 4.5 本章小结
• 结论
• 展望
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢
• 简历