论文摘要
目的：用定向诱导和诱变的方法提高保加利亚乳杆菌降解尿素、肌酐的能力，为慢性肾衰的肠道细菌疗法提供新菌种。方法：1．将出发菌置于尿素+肌酐配制溶液中反应后，取上清液送检，测定其对尿素、肌酐的基础降解能力。2．定向诱导：将出发菌接种于三种高浓度尿毒素培养基中传代定向诱导，20代后每5代取出检测，直到出现阳性结果。待测的菌体，共分为五组：①尿素培养基培养菌组②肌酐培养基培养菌组③尿素+肌酐培养基培养菌组④尿素+肌酐培养基培养菌灭活组⑤空白对照组。加入尿素+肌酐配制溶液中反应，收集上清液检测尿素、肌酐浓度。3．诱变：确定生长对数期→确定DES对保加利亚乳杆菌作用时间→制备单孢子悬液→诱变处理→稀释菌液涂置筛选平板培养→收集菌体悬置溶液中，检测尿素或肌酐溶液的残余浓度为初筛→选能使尿素或肌酐溶液浓度下降的菌株复筛→连续传代，考察其稳定性。结果：1．原始保加利亚乳杆菌的尿素+肌酐溶液的残余浓度无明显变化。2．诱导后的三组保加利亚乳杆菌的尿素+肌酐溶液的残余浓度与死菌对照组及空白对照组相比有明显的下降。三组之间浓度差别无统计意义，但对于尿素残余浓度，以尿素+肌酐组最低，肌酐组最高；肌酐的残余浓度以尿素+肌酐组最低，尿素组最高。3．定向诱导后有降解能力的保加利亚菌作为出发菌，经DES溶液诱变后，筛选出一株对尿素降解能力明显提高的菌株。4．但在尿毒素肉汤培养基传代后，第二代时，降解能力与出发菌无明显差别。结论：1．未经处理的保加利亚乳杆菌不具有降解尿素、肌酐的能力。2．在高浓度尿素或肌酐或尿素+肌酐的定向诱导下，保加利亚乳杆菌都能降解尿素和肌酐；尿素与肌酐有交叉诱导作用；两种诱导物同时加入，有增强诱导酶表达的作用。3．硫酸二乙酯诱变定向育种保加利亚乳杆菌，能使其降解尿素能力提高约26.7％，但遗传稳定性有待提高。