熊去氧胆酸对异烟肼和利福平致小鼠肝损伤的保护作用

论文摘要

目的本研究在建立异烟肼（isoniazid,INH）和利福平（rifampicin,RFP）致小鼠肝损伤动物模型的基础上,观察熊去氧胆酸（ursodeoxycholic acid,UDCA）对INH和RFP致小鼠肝损伤的保护作用,并探讨抗氧化和抗凋亡在UDCA保护INH和RFP致小鼠肝损伤中的作用。方法为建立INH和RFP致小鼠肝损伤的动物模型,选取40只ICR小鼠随机分为对照组（CON组）和INH+RFP组（IR组）,每组20只（雌雄小鼠各半）。CON组经灌胃给予等体积生理盐水,IR组经灌胃给予INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）,连续给药2周,末次给药后6 h收集全血并处死小鼠,留取肝脏,检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TB）和结合胆红素（DB）;计算肝指数（LI）,光镜观察小鼠病理改变;检测肝组织中还原性谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,用TUNEL技术检测肝脏细胞凋亡。为研究不同剂量UDCA对INH和RFP致小鼠肝损伤的保护作用,以及抗氧化在UDCA保护INH和RFP致小鼠肝损伤中的作用,本研究将120只ICR小鼠随机分为,对照组（CON组）,INH+RFP组（IR组）,UDCA对照组（UDCA组）,UDCA低剂量组（UL组）,UDCA中剂量组（UM组）和UDCA高剂量组（UH组）,每组20只（雌雄小鼠各半）。分别经灌胃给予以下处理,CON组:等体积生理盐水;IR组: INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）;UDCA对照组: UDCA 150 mg/（kg·d）;UL组:UDCA 15 mg/（kg·d）+ INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）;UM组:UDCA 50 mg（/kg·d）+ INH 75 mg（/kg·d）+RFP 150 mg（/kg·d）;UH组:UDCA 150 mg（kg·d）+ INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）,分别在给予INH 75mg/（kg·d）和RFP 150 mg/（kg·d）处理前30 min给予不同剂量UDCA进行预处理;所有小鼠每日灌胃给药1次,在每次给药前1 h禁食,连续2周,末次给药后禁食6 h,收集全血后处死,留取肝脏标本,分离血清用于检测ALT、AST、ALP、TBA、TB和DB水平;肝组织切片检测肝脏病理改变;检测肝组织中GSH和MDA含量,免疫组化方法检测肝脏中硝化酪氨酸（3-NT）。为研究抗凋亡在UDCA保护INH和RFP致小鼠肝损伤中的作用,本研究将40只雌性ICR小鼠随机分为对照组（CON组）,INH+RFP组（IR组）,UDCA对照组（UDCA组）和UDCA高剂量组（UH组）,每组10只,分别经灌胃给予以下处理,CON组:等体积生理盐水;IR组: INH 75mg（/kg·d）+RFP 150 mg（/kg·d）;UDCA对照组: UDCA 150 mg/（kg·d）;UH组:UDCA 150 mg/（kg·d） + INH 75mg/（kg·d）+RFP 150 mg/（kg·d）。所有小鼠每日灌胃给药1次,在每次给药前1 h禁食,连续2周,末次给药后禁食6 h处死,留取肝脏标本。用TUNEL技术检测肝脏细胞凋亡;采用Western blotting方法检测肝脏中Bax,Bcl-2蛋白表达;免疫组化方法检测肝脏中Caspase-3蛋白表达。结果INH和RFP处理后小鼠血清ALT、AST和ALP水平升高, TB、DB和TBA水平明显升高;INH和RFP处理后小鼠肝脏组织HE染色显示,肝细胞出现脂肪变性、轻度坏死和炎症细胞增多;INH和RFP处理降低小鼠肝匀浆中GSH含量,显著升高肝匀浆中MDA含量;TUNEL方法检测肝脏细胞凋亡,结果显示INH和RFP处理后小鼠肝脏凋亡细胞增多。小鼠在给予INH和RFP处理前30 min给予不同剂量UDCA预处理,结果发现:UDCA降低小鼠血清中ALT水平,UH组小鼠血清ALT下降最明显,呈剂量-效应关系;UDCA轻度降低小鼠血清中ALP和AST水平;UDCA对小鼠血清TB、DB和TBA无明显影响。不同剂量UDCA预处理明显降低INH和RFP引起的小鼠肝指数升高,UH组小鼠肝指数降低最明显。肝脏病理提示UDCA预处理后小鼠肝脏外观红润,肝脏湿重有下降趋势;光镜下肝细胞索排列整齐,肝细胞空泡样变性和脂肪变性减轻。不同剂量UDCA预处理显著减弱INH和RFP引起的脂质过氧化和GSH耗损,呈剂量-效应关系。用免疫组化的方法检测3-NT表达,结果发现,IR组3-NT表达增多,UH组3-NT表达减少。雌性小鼠在给予INH和RFP处理前30 min给予高剂量UDCA预处理,用TUNEL方法检测肝脏细胞凋亡,结果显示IR组肝脏细胞凋亡增多,UH组肝脏细胞凋亡明显减轻。用Western Blotting方法检测肝脏凋亡相关蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,结果表明,IR组Bax表达增多,Bcl-2表达减少;高剂量UDCA预处理后,Bax表达减少,Bcl-2表达增多。用免疫组化的方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3表达,结果提示,INH和RFP可上调Caspase-3表达, UDCA预处理后下调Caspase-3表达。结论连续2周给予INH和RFP引起小鼠急性肝损伤,导致肝脏细胞凋亡和氧化损伤。UDCA预处理对INH和RFP致小鼠肝损伤有保护作用, UDCA保护INH和RFP致小鼠肝损伤与抗氧化和抗凋亡有关。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 1. 前言
• 2. 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 3. 结果
• 3.1 INH 和 RFP 致小鼠肝损伤模型的建立
• 3.2 UDCA 预处理对 INH 和 RFP 致小鼠肝损伤的保护作用
• 3.3 UDCA 预处理对肝脏凋亡蛋白表达的影响
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 6. 参考文献
• 7. 附录 个人简历
• 8. 致谢
• 综述
• 参考文献