中药更年春对破骨细胞的作用及对骨代谢相关基因表达的影响

论文摘要

绝经后骨质疏松（PMOP）是影响老年妇女健康的一种常见病和多发病,是骨质疏松（OP）的一种常见类型。妇女绝经后,随着雌激素水平的下降,导致骨质疏松的发生,OP表现为骨小梁结构破坏、骨的脆性增高、骨力学强度下降、骨折危险性增加。所以加强对PMOP的防治研究意义重大。雌激素替代治疗（ERT）是预防和治疗绝经后骨质疏松最有效的方法之一。但是,ERT使子宫内膜癌、乳腺癌、心脏疾患和中风等的发病率上升,使其应用受到了限制。而大量临床和实验研究证明,中医中药对主要由雌激素下降引起的围绝经期综合征有较好的治疗效果,而且基本无副作用,因此用中医中药治疗与雌激素下降有关的OP面临着前所未有的走向世界的新契机。“更年春”（GNC）是我院根据中医“肾主骨”理论自行研制的中药制剂,主要成分为补肾中药。临床治疗更年期综合症,效果良好。实验发现:GNC对去卵巢大鼠（OVX）椎骨和股骨的骨密度与生物力学参数有显著的改善作用,并且没有刺激子宫组织增生肥大的副作用。研究还发现,GNC在体外对成骨细胞（OB）的增殖、分化和矿化有明显促进作用。但对破骨细胞（OC）的作用尚有待研究。本实验拟通过体外分离、培养OC,研究中药GNC药物血清对新生大鼠OC形成分化、骨吸收功能及凋亡的影响,以及用Real-time PCR方法检测给予GNC后OVX大鼠骨髓微环境中相关基因的表达变化,以进一步探讨GNC抗骨质疏松作用的分子机制。一、更年春方对破骨细胞的分化、骨吸收活性及凋亡的影响目的探讨更年春方对破骨细胞的分化、骨吸收活性及凋亡的影响。方法分离培养大鼠OC,加入含不同浓度“更年春”的药物血清培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色结合光镜观察对TRAP阳性多核破骨细胞计数;用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝面积;采用Annexin V-FITC凋亡荧光染色结合TRAP染色法计数OC的凋亡率结果与生理盐水组相比,尼尔雌醇组和GNC高剂量组TRAP染色阳性的OC数量显著减少（P＜0.01）;破骨细胞的凋亡率明显增加（P＜0.01）;尼尔雌醇组,更年春高、中剂量组骨吸收陷窝的面积明显减少（P＜0.01）。GNC高剂量组与尼尔雌醇组相比差别无显著性。结论GNC可能通过抑制OC的形成和分化、抑制OC的骨吸收活性,促进OC发生凋亡,发挥其抗骨质疏松的作用。二、更年春方对骨髓微环境中骨代谢相关基因表达的影响目的观察更年春方对OVX大鼠骨髓微环境中骨保护素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）mRNA表达的影响,探讨更年春抗绝经后骨质疏松的可能分子机制。方法取健康10月龄雌性SD大鼠42只,随机平均分为假手术组（S）,生理盐水组（N）、尼尔雌醇组（E）、更年春高剂量组（H）、更年春中剂量组（M）和更年春低剂量组（L）。假手术组仅切除卵巢周围少许脂肪,其余5组均切除卵巢。灌药3天后取腰椎冲洗骨髓提取RNA,实时定量PCR法（Real-timequantitative PCR）检测上述因子mRNA的表达情况。结果尼尔雌醇和高剂量GNC可上调OVX大鼠骨髓微环境中OPG的mRNA的表达（P＜0.05）,进而使RANKL/OPG值下降（P＜0.01）;使M-CSF的mRNA的表答下降（P＜0.05）。GNC中、低剂量组无显著作用,GNC高剂量组和尼尔雌醇组相比,差异无显著性。结论更年春方抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达和RANKL/OPG值有关。

论文目录

• 英文缩写
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 更年春方对破骨细胞的分化、骨吸收活性及凋亡的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 更年春方对骨髓微环境中骨代谢相关基因表达的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 综述