论文摘要
苯丙烯酰-5-羟色胺化合物（PAHA）具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤和强紫外吸收等活性，正日益受到关注，已有研究主要集中于各PAHA物质的分离、鉴定及其药理方面，而适合于工业化的提取纯化研究却很少，为此，本文以红花籽中二个主要PAHA，即香豆酰-5-羟色胺（CS）和阿魏酰-5-羟色胺（FS）为研究重点，在建立PAHA定量分析方法基础上，采用醇法浸取、生物转化、大孔树脂和硅胶吸附组合技术，进行了从红花籽粕中提取纯化PAHA工艺的研究，旨在得到回收率和纯度高且易于产业化的工艺条件。论文建立了快速检测PAHA的反相高效液相色谱分析方法，线性范围50-2000 ng，平均加标回收率99．0％，重复测定的变异系数小于3．2％；建立了艾氏试剂测定PAHA总量的分光光度法，线性范围0．05-0．25 mmol／L，平均加标回收率99．5％，重复测定的变异系数小于2．0％。两种方法的测定结果令人满意。由正交法确定了60％乙醇回流浸提红花籽PAHA的优化工艺条件，提取得率和纯度分别为9．96％和7．87％，PAHA得率为0．784％。浸出过程符合缩芯模型，受孔内扩散所控制。当物料粒度为35-80目时，模型可较好描述PAHA浸出动力学过程，误差20％以内。通过响应面法确定了β-D-葡萄糖苷酶转化香豆酰-5-羟色胺单葡萄糖苷（CSG）、阿魏酰-5-羟色胺单葡萄糖苷（FSG）为CS、FS的优化工艺条件，CSG、FSG的转化率均达90％以上，酶转化物中CS和FS总量由转化前的6．40％提高1．22倍，至7．76％。2-羟基牛蒡子苷等杂质含量下降，提取物品质提高。研究建立了XDA-1大孔吸附树脂柱层析法纯化PAHA的方法，确定了恒组成溶剂洗脱和分步洗脱条件。恒组成溶剂洗脱时，产物中CS和FS总量由7．76％提高到58．1％，较粗提物提高7．5倍，收率84．4％。分步洗脱时，产物中CS和FS总量由3．68％提高到47．0％，较粗提物提高12．8倍，收率为72．9％。在此基础上，建立了硅胶柱层析进一步精制PAHA的方法，产品纯度由58．1％提高至90．4％，收率87．2％。采用熔点测定、紫外和红外光谱、高压液相色谱／质谱、核磁共振谱对C18层析柱分离得到的二个PAHA单体进行了结构鉴定，经与文献对照，分别确认为香豆酰-5-羟色胺（CS）和阿魏酰-5-羟色胺（FS），结构为反式。表明提取纯化和生物转化过程对CS、FS的化学结构无明显影响。采用DPPH·法、邻二氮菲法、邻苯三酚自氧化法和Rancimat法研究了四种PAHA化合物（FS、CS、CSG、FSG）的清除自由基活性，结果表明，清除自由基能力依次为CS≈FS>FSG>CSG，并存在浓度依赖关系。采用噻唑蓝法（MTT）初步研究了四种PAHA化合物的体外抗肿瘤活性。结果表明，CS、FS对肺癌细胞H446、肝癌细胞HepG-2、黑素瘤细胞B16具有一定的抑制癌细胞增殖活性，并存在浓度依赖关系，而对乳腺癌细胞MCF-7、MB-231无抑制活性。