论文摘要
长骨骨干的大段缺损是骨缺损中最难修复的一种,而利用组织工程技术体外构建大段骨移植物,即大段组织工程活化骨,目前尚难以实现。其难点在于大段活化骨要求支架承载很大数量的细胞并实现从支架载体表面到内部深处细胞的均匀分布和正常生物学活性,需要建立包括种子细胞获取、支架载体制造、细胞—载体复合物体外培养等方面系统的理论和技术方法。 课题目的 本课题研究拟从优化支架结构及体外培养环境两方面入手,改良人成骨细胞分离、培养方法,培养、扩增人成骨细胞作为种子细胞;提出并实现大段组织工程骨支架的微结构可控化设计、制造;研究设计适用于大段组织工程骨体外动态三维培养的旋转灌注式生物反应器;观察新的支架结构及体外培养系统对支架内部成骨细胞附着、生长、增殖的影响及作用,探讨体外构建大段组织工程活化骨的理论和技术方法。 实验方法 1、人成骨细胞体外分离、培养方法的改良:采用人髂骨骨片,行胰蛋白酶预消化+组织块培养的联合方法,获取人成骨细胞,采用倒置显微镜观察,生长曲线和倍增时间测定,苏木精—伊红（Heamatoxylin-eosin,HE）染色,碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）、骨钙素（Osteocalcin,OCN）含量测定,ALP、钙结节染色等方法观察人成骨细胞的生物学特性。
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