骨髓增生异常综合征患者RIZ1基因表达及其启动子甲基化研究

论文摘要

研究目的1.分析骨髓增生异常综合征（MDS）不同亚型及不同危险度患者中RIZl基因表达的状况及其与临床特征的相关性；2.分析骨髓增生异常综合征（MDS）不同亚型及不同危险度患者中的RIZl基因的甲基化状态及其与临床特征的相关性；3.探讨RIZ1基因的表达与其启动子甲基化状态相关性及其与骨髓增生异常综合征（MDS）的发病机制的相关性。研究方法1.选取46例初发MDS患者以及10例健康人作为研究对象。所有MDS患者均为我院门诊和住院患者,其中男性33例,女性13例,中位年龄16-83岁；10例健康人作为对照。根据WHO诊断及分型标准,对所有患者进行分类：包括难治性贫血/难治性贫血伴有环状铁粒幼细胞/难治性血细胞减少伴有多系发育异常（RA/RARS/RCMD）17例、难治性贫血伴有原始细胞过多-Ⅰ（RAEB-Ⅰ）9例、难治性贫血伴有原始细胞过多-Ⅱ（RAEB-Ⅱ）14例、MDS转变成急性白血病（MDS/AML）6例。依照国际预后积分系统（IPSS）（骨髓原始细胞比例、染色体核型异常、细胞数减少的造血细胞系数目）标准,将所有患者分为低危组（0分）9例、中危-1组（0.5-1.0分）19例、中危-2组（1.5-2.0分）10例和高危组（≥2.5分）8例。2.应用实时荧光定量PCR （real time fluorescence quantitative PCR）方法检测MDS不同亚型及不同危险度分级的患者与健康人骨髓标本中RIZ1基因nRNA的表达状况。3.应用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR, MSP）方法检测MDS不同亚型及不同危险度分级的患者与健康人骨髓标本RIZl基因启动子甲基化状态。4.采用R显带技术检测MDS患者骨髓标本中染色体的核型。结果1.骨髓增生异常综合征（MDS）患者、健康对照组骨髓细胞中RIZ1基因mRNA相对表达量的中位数分别为0.5571（0.3335,0.8147）,1.0034（0.9201、1.4517）。与健康对照相比,骨髓增生异常综合征患者中的RIZ1mRNA表达量下降,两者有统计学差异P<0.001),其中78%（36/46）的骨髓增生异常综合征（MDS）患者中该基因表达下降。依照WHO分型,RA/RARS/RCMD0.7453（0.5170,1.1446）、RAEB-I0.6025（0.2693,07565）、RAEB-II0.3664（0.2535,0.7697）、MDS/AML0.3516（0.2788,0.5764）各亚型分组中的mRNA的表达水平与健康对照组相比,均具有统计学差异（P值分别为：0.013,0.001,<0.001,<0.001）。其中RA/RARS/RCMD0.7453<0.5170,1.1446)与RAEB-Ⅱ0.3664（0.2535,0.7697）、MDS/AML0.3516（0.2788,0.5764）相比,均具有统计学差异（P值分别为：0.017、0.036）。依照国际预后积分系统（IPSS）:低危、中危-1、中危-2及高危患者中的RIZ1mRNA的表达水平分别为0.7795（0.6358,1.0371）,0.5600（0.3645、0.9314）,0.4990（0.2603、0.7697）,0.3255（0.2293、0.4170）均较健康对照组表达量下降,且均有统计学差异（P值分别为：0.040,0.001,<0.001,<0.001）。其中低危组的表达水平与高危组相比,具有统计学差异（P=0.011）。经统计学分析RIZl基因的表达水平与年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数及染色体核型无相关性。2.采用甲基化特异性PCR技术对30例骨髓增生异常综合征（MDS）患者和10例健康对照组骨髓中RIZ1基因进行分析,有11例出现甲基化,甲基化率为37%（11/30）,正常对照组中均为非甲基化。依照WHO分型标准,RA/RARS/RCMD11例,RAEB-I8例,RAEB-Ⅱ7例、MDS/AML4例,甲基化率分别为18.1%、37.5%、42.9%、75.0%。依照国际预后积分系统（IPSS）,包括低危组6例、中危-1组12例、中危-2组7例和高危组5例,甲基化率分别为16.7%、25.0%、57.1%、60.0%。经统计学分析,RIZl启动子的甲基化状态在不同亚型及不同危险度分级差异均未见有统计学差异（P值分别为0.226、0.237）。该基因启动子区的甲基化状态与年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数及染色体核型无相关性。3.30例骨髓增生异常综合征（MDS）患者中有22例RIZl基因表达降低,其中这22例中有11例伴有启动子区甲基化,甲基化率为50%,在11例RIZl启动子甲基化MDS患者的骨髓标本中的RIZ1基因相对表达量的中位数为0.3347（0.2062,0.3553）,在未发生RIZl启动子甲基化的19例患者中RIZI基因的表达量的中位数为0.7664（0.5599,1.1489）,两者有统计学差异（P<0.001）,表明发生启动子甲基化的MDS患者的骨髓细胞中RIZl的表达量低于启动子未发生甲基化的患者。结论1.骨髓增生异常综合征（MDS）患者中RIZ1mRNA表达水平下降较常见,且在不同的亚型及不同危险度分级中表达存在差异,提示该基因可能参与MDS的发病,并与疾病的进展有关。2.骨髓增生异常综合征（MDS）中存在RIZI基因启动子甲基化现象,且在不同亚型及不同危险度分级中甲基化率不同,提示RIZI基因启动子甲基化可能参与骨髓增生异常综合征的发生。3.骨髓增生异常综合征（MDS）中RIZ1基因启动子甲基化与RIZ1mRNA表达呈负相关,RIZ1基因表达水平降低的部分原因是由于存在其启动子甲基化。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 资料与方法
• 1. 材料
• 2. 临床资料与方法
• 3. 统计学方法
• 结果
• 1. 依照WHO分型,RIZ1基因的表达状况
• 2. 依照IPSS国际预后积分系统,RIZ1基因的表达状况
• 3. 依照WHO分型,RIZ1基因的甲基化状态
• 4. 依照IPSS国际预后积分系统,RIZ1基因的甲基化状态
• 5 骨髓增生异常综合征患者中RIZ1基因的表达与其启动子区甲基化状态的关系
• 6. 骨髓增生异常综合征患者中RIZ1基因的表达与临床特征的相关性
• 7. 骨髓增生异常综合征患者中RIZ1启动子区甲基化状态与临床特征的相关性
• 讨论
• 结论
• 附表
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 作者简介
• 致谢