喜树生长过程中喜树碱及10-羟基喜树碱的代谢规律研究

论文摘要

本项研究利用高效液相色谱方法较为系统地测定了贵阳地区不同生长季节喜树嫩叶、成熟叶和果实中喜树碱及10-羟基喜树碱含量的动态变化并对贵州省不同地区喜树叶和喜树果中喜树碱及10-羟基喜树碱的含量进行了分析。所获结果如下:建立了同时测定喜树叶中喜树碱和10-羟基喜树碱含量的高效液相色谱分析方法。贵州省不同地区喜树叶和喜树果中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量差异显著,其中以铜仁地区所产的喜树中喜树碱含量最高,六盘水地区的喜树中10-羟基喜树碱含量最高,对喜树碱及10-羟基喜树碱含量进行综合分析认为六盘水地区的喜树中二者含量均较高,可作为贵州省喜树和喜树碱产业化的优势地理种源。在一年的生长过程中,喜树嫩叶中喜树碱的含量变化为一双峰曲线,分别在7月和9月达到峰值,其中7月的含量最高;成熟叶中喜树碱的含量持续下降;除4-5月,喜树成熟叶中的喜树碱含量略高于嫩叶中的含量,其他月份喜树嫩叶中喜树碱含量均显著高于成熟叶中的含量。在一年的生长期内,不同月份喜树嫩叶中10-羟基喜树碱含量波动很大,4月含量较高,5月显著下降,此后基本在这两个水平间升降变动,10月以后持续上升;成熟叶中10-羟基喜树碱除在7月降到最低水平,其他时期是持续增加的变化趋势。在生长过程中,喜树叶片中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量变化呈现出明显的相关性。早期喜树嫩叶中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量均较高,6月以后,二者的变化呈现出较好的互补性;在整个生长期,成熟叶中喜树碱的含量持续下降,而10-羟基喜树碱的含量除在7月出现骤降,此时为嫩叶中喜树碱的含量达到最高的时候,其他时期与喜树碱的变化相反为持续上升的趋势。在果实成熟的过程,喜树碱和10-羟基喜树碱含量均是持续增加的,完全成熟时二者含量达到最高,此时为喜树果采收的最佳时期。实验结果表明,喜树碱和10-羟基喜树碱特异的积累在喜树的幼嫩组织和果实中,在这些容易受到伤害的部位和生长的关键时期担当着化学防御的作用。二者在叶片中的代谢动态呈现出的相关性暗示喜树碱和10-羟基喜树碱之间转化的途径可能不仅是由喜树碱到其衍生物10-羟基喜树碱的方式,或许还存在由10-羟基喜树碱去羟基生成喜树碱的趋向。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 综述
• 1.1 喜树碱及其衍生物的发现和理化性质
• 1.1.1 喜树碱及其衍生物的发现
• 1.1.2 喜树碱的理化性质
• 1.2 喜树碱及其衍生物的药理作用机制和临床应用
• 1.2.1 喜树碱及其衍生物的药理作用机制
• 1.2.2 喜树碱及其衍生物的临床应用
• 1.2.2.1 10-羟基喜树碱
• 1.2.2.2 伊立替康
• 1.2.2.3 拓扑替康
• 1.2.2.4 9-硝基喜树碱和9-氨基喜树碱
• 1.3 喜树碱及其衍生物的提取与测定
• 1.3.1 喜树碱及其衍生物的提取
• 1.3.1.1 渗漉提取
• 1.3.1.2 索式提取
• 1.3.1.3 柱层析提取
• 1.3.1.4 树脂吸附提取
• 1.3.1.5 酸水提取
• 1.3.1.6 碱法提取
• 1.3.1.7 超声提取
• 1.3.1.8 温浸提取
• 1.3.2 喜树碱及其衍生物含量的测定方法
• 1.4 喜树碱及其衍生物的代谢生物学研究
• 1.4.1 喜树碱和10-羟基喜树碱积累的组织特异性
• 1.4.2 喜树碱和10-羟基喜树碱积累的发育阶段特异性
• 1.4.3 喜树碱和10-羟基喜树碱积累的环境因子特异性
• 1.5 本课题研究的目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 仪器与试剂
• 2.3 技术路线
• 2.4 喜树碱及10-羟基喜树碱的提取
• 2.4.1 提取溶剂的筛选
• 2.4.2 提取方法的选择
• 2.4.4 样品的预处理
• 2.4.5 样品制备
• 2.5 喜树碱及10-羟基喜树碱的测定
• 2.5.1 薄层层析（Thin Layer Chromatogramsofgenus,TLC）法分析
• 2.5.2 高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）法分析
• 2.5.2.1 检测波长及流动相的选择
• 2.5.2.2 色谱条件的确立
• 2.5.2.3 对照品溶液的制备
• 2.5.2.4 标准曲线的绘制
• 2.5.2.5 精密度实验
• 2.5.2.6 稳定性实验
• 2.5.2.7 重复性实验
• 2.5.2.8 回收率实验
• 2.5.3 喜树碱及10-羟基喜树碱含量的测定
• 2.6 数据处理方法
• 3 结果分析
• 3.1 不同地区喜树叶片和果实中喜树碱及10-羟基喜树碱的含量差异
• 3.2 不同季节喜树叶片中喜树碱的含量变化
• 3.3 不同季节喜树叶片中10-羟基喜树碱的含量变化
• 3.4 不同季节喜树叶片中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量变化相关性
• 3.5 不同季节喜树果实中喜树碱及10-羟基喜树碱的含量变化
• 3.6 当年喜树叶片和果实与放置一年喜树叶片和果实中喜树碱及10-羟基喜树碱含量变化
• 4 讨论
• 4.1 色谱条件的探讨
• 4.2 环境因子对喜树碱和10-羟基喜树碱含量的影响
• 4.3 不同季节喜树叶片中喜树碱含量的变化
• 4.4 不同时期喜树叶片中喜树碱与10-羟基喜树碱含量变化的相关性
• 5 小结
• 5.1 色谱条件
• 5.2 喜树碱和10-羟基喜树碱的提取方案
• 5.3 不同地区喜树叶、喜树果中喜树碱及10-羟基喜树碱的含量差异
• 5.4 不同季节喜树果中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量变化
• 5.5 不同生长季节喜树叶片中喜树碱的含量变化
• 5.6 不同生长季节喜树叶片中10-羟基喜树碱的含量变化
• 5.7 不同时期喜树叶片中喜树碱及10-羟基喜树碱含量变化的相关性
• 6 建议与展望
• 参考文献
• 致谢
• 图版
• 攻读硕士期间发表的论文
• 参加的科研工作