丝裂原激活蛋白激酶对金鱼发育的调控作用

论文摘要

丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）是细胞内的至关重要的蛋白激酶。研究证实,MAPK信号转导通路存在于大多数细胞内,将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,并引起细胞生物学反应（如细胞增殖、分化、转化及凋亡等）的过程中具有至关重要的作用。MAPK可分为三个主要的亚群,即细胞外信号调节激酶（ERK）,应激活化蛋白激酶（JNK）和p38MAPK。本文应用Western Blot分析、免疫沉淀、激酶活性分析、显微注射等技术研究和探讨了MAPK对金鱼发育的影响和调控作用。所得实验结果如下: （1） MAPK三种主要成员在金鱼的晶体上皮、晶体纤维、视网膜、大脑、心脏以及肌肉六种组织中的表达和活性存在着组织特异性。ERK的表达和活性水平最高,在金鱼的六种组织中都存在着强烈的表达和活性水平;JNK1只在晶体纤维、视网膜、大脑和心脏中表达,在晶体上皮中的表达极其微弱;JNK2在视网膜、心脏、大脑以及肌肉组织中均有一定程度的表达;但在晶体上皮,JNK2只有微弱的表达;p38在金鱼的视网膜、大脑、心脏以及肌肉中存在表达,而在晶状体的上皮和纤维中没有表达,在金鱼六种组织中不存在p38的磷酸化活性。 （2） 比较和检测了金鱼单倍体胚胎与二倍体胚胎的MAPK的表达差异。在尾芽时期,不同倍性的胚胎内的ERK蛋白总量存在着明显差别。单倍体胚胎的ERK表达水平要高于二倍体胚胎内的ERK表达。在色素期,ERK在正常自交二倍体胚胎中的表达水平上升,与单倍体胚胎之间的ERK表达差异程度不如尾芽期明显。而在眼睛不正常的单倍体胚胎中完全缺少了JNK的表达和活性。 （3） 将RAF、MEK、ERK的显性突变体基因通过显微注射转染至金鱼的受精卵,分析了当MAPK信号通路被抑制后对金鱼发育的影响。通过激酶活性分析证实注射的DNMRAF,DNMMEK,DNMERK使金鱼胚胎的内源性RAF、MEK、ERK的活性被抑制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 1 哺乳动物MAPK途径的发现
• 2 MAPK途径激活的基本特点
• 2.1 三酶级联反应
• 2.2 MAPK的双磷酸化激活
• 3 MAPK主要家族成员
• 4 MAPK途径的生物学功能
• 实验部分
• 1 MAPK在成体金鱼不同组织中的表达活性
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 1.4 讨论
• 2 不同倍性金鱼MAPK表达和活性差异的比较
• 2.1 实验材料
• 2.2 方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 3 注射MAPK的Dominant-Negative突变体对金鱼发育的影响
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 原创性声明