影响乙型肝炎病毒感染者预后的相关因素研究

论文摘要

第一部分乙肝病毒滴度水平与肝癌发病风险分析背景和目的:目前全球约有4亿人群感染乙肝病毒,其中约20%—40%进展为肝硬化或肝癌。本实验通过病例一对照研究,分析乙型肝炎感染者血清HBV DNA水平与肝癌发病风险之间的关系。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测肝癌组（170例）和对照组（276例）病例1996年的血清HBV DNA水平,采用非条件Logistic回归模型研究慢性乙型肝炎感染者血清基线HBV DNA水平与肝癌发生之间的关系。对肝癌组中46例尚同时保存的肝癌发生前后血清标本同时检测HBV DNA水平进行比较,对276例对照组初次和末次血清中HBV DNA水平进行比较。结果:采用非条件Logistic回归模型研究方法,在调整年龄,吸烟史,饮酒史,家族史等影响因素后,HBV DNA水平在≥104—＜105;≥105—＜106;≥106—＜107;≥107 copies/ml发生肝癌的OR值（95%的可信区间）分别为2.834（1.237-6.492）,48.403（14.392-162.789）,42.252（14.784-120.750）,和14.819（6.992-31.411）。46例所比较的肝癌发生前后血清HBV DNA水平无统计学显著差异。结论:慢性乙肝感染者血清基线HBV DNA水平与肝癌的发生相关,血清基线HBVDNA水平≥104拷贝/ml的慢性乙肝感染者,发生肝癌的危险性显著高于血清基线HBV DNA水平＜104拷贝/ml的感染者,HBV DNA水平在≥104—＜107 copies/ml区间,随着血清HBV DNA水平的升高,发生肝癌的危险性亦增高。第二部分乙肝病毒基因突变与肝癌相关性的研究研究背景:人群感染乙肝病毒后预后差异很大,可以表现为急性肝炎、慢性肝炎、部分会进展为肝硬化,甚至肝癌。感染者预后除了与宿主的免疫反应有关,肝炎病毒本身也是一个重要的因素。尽管近年来关于乙肝病毒基因突变的研究在各个国家和地区屡有报道,但目前的研究多为横向比较乙肝感染者不同预后者中突变发生情况,缺乏纵向分析病毒基因突变与不同预后的关系。目的:分析原发性肝癌患者中乙肝病毒基因序列的变异情况,并纵向比较同一个乙肝感染者在乙肝—肝癌发展过程中乙肝病毒基因组的变化。另外,将肝癌患者的乙肝病毒基因序列与来自同一队列的肝功能AFP水平及B超持续正常的乙肝无症状携带者的病毒基因序列做比较,以期从病毒基因组水平寻找与肝癌发生相关的病毒基因突变位点。方法:研究对象均来自于江苏省启东市乙肝感染者的随访队列。实验中对24例原发性肝癌（HCC）患者肝癌确诊前后的血清进行乙肝病毒（HBV）DNA分段扩增,经琼脂糖凝胶电泳后,进行测序。病毒分析基因型以及病毒各基因区序列突变情况。寻找高频突变位点。并与16例来自同一地区的乙肝无症状携带者血清中的乙肝病毒序列进行比较。结果:肝癌组中,在PreS1、PreS2、S区未发现高频突变位点。在完成的20个HCC患者HBV的前C区结果中,9个存在nt1896G-A位的突变。5个存在nt1899G-A位的突变。其中1例存在nt1896/1899位的双突变。在完成的18个HCC患者HBV的Basal core promoter（BCP）区测序结果中,17个存在nt1762A-T/1764G-A位的突变。将所测得的序与各自肝癌发生后样本中的病毒序列比较。发现肝癌发生前后乙肝病毒基因序列基本无变化,突变在早于肝癌发生前即已经存在。在无症状携带组中,15/16例成功测序,其中6例存在nt1896G-A位的突变,3例nt1896位G/A杂合存在。3例存在nt1899G-A位的突变,未发现nt1896/1899位的双突变。9/16例存在BCP区nt1762A-T/1764G-A位的突变。nt1762/1764位的突变普遍存在于乙肝感染者中。在未经过抗病毒治疗的情况下,乙肝病毒基因序列在肝癌发生前后未发现有意义变化。所发生的突变在早于肝癌发生前即已经存在。第三部分蛋白质芯片技术筛选肝癌血清标志物的初步研究背景:肝细胞性肝癌（HCC）是全世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。早期诊断和早期治疗肝癌是提高患者成活率的关键。B超,结合甲胎蛋白（AFP）水平是目前最常用的筛查肝癌的手段,但灵敏度和特异度并不令人满意。因此,寻找肝癌新的能应用于早期诊断的肿瘤标记物就显得尤为重要。基于MALDI-TOF MS的液体芯片飞行时间质谱技术具有准确性高、稳定性好、灵敏度高等特点,为发现潜在的肝癌标志物提供了新的方法。方法:我们选取了24肝癌患者,25例慢性乙型肝炎患者和24名健康对照进行初步肽谱研究。采用铜螯合磁珠纯化血清,基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）获得肽谱,再由flexAnalysis和ClinProToolsTM软件进行质谱图编辑,分析并筛选差异多肽。结果:将肝癌组和慢性乙型肝炎组血清肽谱比较后,发现了5个差异表达峰,分别为1405,1906,1256,1421,2694 Da。肝癌组与健康对照组血清肽谱比较发现4779,1406,4197,5333,5478,5520,4078,4107 Da等8个差异表达峰。结论:MALDI-TOF MS技术的特异性及敏感性远高于目前所采用的某一单独的血清标志物,其结果对进一步研究肝癌的蛋白组学改变可能具有重要意义,并为寻找肝癌新的分子标志物提供了一个独特的平台。

论文目录

• 缩略语列表
• 第一部分 乙肝病毒滴度水平与肝癌发病风险分析
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 乙肝病毒基因突变与肝癌相关性的研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 蛋白质芯片技术筛选肝癌血清标志物的初步研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 致谢