论文摘要
目的:探讨肺积宁方对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子（VEGF）基因蛋白表达的影响。方法:体外培养A549细胞,选择不同浓度肺积宁含药培养基与人肺癌细胞共同孵育72h后,应用倒置相差显微镜、荧光显微镜观察细胞生长状况和凋亡细胞形态变化,采用MTT法检测细胞生长抑制率、PI/ AnnexinV -FITC双染法检测细胞凋亡率、ELISA法检测细胞上清液中VEGF含量变化。结果:经MTT实验测定,肺积宁方各浓度对人肺腺癌A549细胞的增殖均有显著的抑制作用,呈良好的量效关系。肺积宁方对A549细胞IC50是200mg/ml,我们选用了30mg/ml,100mg/ml, 200mg/ml, 1100mg/ml四个浓度作为本实验的四个剂量组,作用时间为72h。在倒置显微镜下观察细胞生长状态,对照组细胞贴壁生长状态良好,但随着作用浓度的增加,细胞由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,细胞间距增大,折光性增强。PI/ AnnexinV -FITC双染,流式细胞仪下检测细胞凋亡率,可测得本方可以诱导A549细胞凋亡,并随着药物浓度的增大,凋亡细胞的数量逐渐增加。经X2检验,四个浓度剂量组的细胞凋亡率均高于正常对照组,差异性显著（P<0.05）;高浓度剂量组（1100mg/ml）处理后细胞凋亡率（44.8%）明显高于对照组（4.3%）,p<0.01。经PI/ AnnexinV -FITC双染,在荧光显微镜下,可见部分细胞的细胞核呈大小不等、形态不规则的碎片状或梅花状,为典型的细胞凋亡形态,并随着浓度增加,每视野下的凋亡细胞增加。各剂量组均可使VEGF基因蛋白表达下调,呈明显的量效关系,当浓度为200mg/ml和1100mg/ml时,与对照组相比,差异性显著（p<0.01）。结论:肺积宁方能抑制人肺腺癌A549细胞增殖,其抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡和下调VEGF基因蛋白表达来实现的。