海龙科四种药用海龙抗肿瘤蛋白提取工艺及其活性研究

论文摘要

为进一步研究海龙抗肿瘤活性蛋白,在前期研究的基础上,采用活性导向方法优化并建立了以蒸馏水为提取溶剂,离子交换和凝胶过滤相结合进行分离纯化的海龙抗肿瘤蛋白提取工艺。采用此工艺对四种药用海龙(粗吻海龙、尖海龙、刁海龙及拟海龙)所含抗肿瘤蛋白进行分离纯化,分析比较其性质和体外抗肿瘤活性,发现四种海龙抗肿瘤活性无明显差异,所含抗肿瘤活性蛋白为同一蛋白。荧光显微镜观测和流式细胞术分析结果表明海龙蛋白可诱导肿瘤细胞的凋亡。海龙蛋白与甲氨蝶呤联合作用于LoVo细胞时,表现出明显的协同效应。急性毒性及体内活性实验表明,海龙蛋白未对正常小鼠表现出明显毒性;可显著抑制S180肉瘤小鼠的肿瘤生长,并具有一定的增强免疫的作用。本研究为扩大利用和合理开发海龙及海洋生物资源奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 动物来源的蛋白/多肽类抗肿瘤作用研究
• 1.2 海龙抗肿瘤作用研究
• 1.3 立题意义及研究内容
• 第二章 海龙抗肿瘤活性蛋白的分离纯化
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 药材
• 2.1.2 细胞株
• 2.1.3 主要试剂及耗材
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 粗吻海龙粗蛋白的提取
• 2.2.2 粗蛋白的纯化
• 2.2.3 蛋白含量的测定
• 2.2.4 蛋白性质检测
• 2.2.5 体外抗肿瘤活性检测
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 不同溶剂对粗吻海龙活性蛋白提取的影响
• 2.3.2 粗蛋白的分离纯化
• 2.3.3 WS1 的纯度检测
• 2.3.4 海龙抗肿瘤蛋白提取工艺的确定
• 2.4 小结与讨论
• 2.4.1 不同溶剂的提取
• 2.4.2 分离方法的选择
• 第三章 海龙科四种药用海龙的抗肿瘤活性
• 3.1 实验仪器与材料
• 3.1.1 药材
• 3.1.2 细胞株
• 3.1.3 主要试剂及耗材
• 3.1.4 主要仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 四种海龙蛋白的制备
• 3.2.2 蛋白性质检测
• 3.2.3 体外抗肿瘤活性检测
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 四种海龙蛋白的SDS-PAGE 图谱比较
• 3.3.2 四种海龙蛋白的体外抗肿瘤活性比较
• 3.4 小结与讨论
• 第四章 海龙蛋白诱导细胞凋亡作用和协同抗肿瘤效应
• 4.1 实验材料与仪器
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 细胞株
• 4.1.3 主要试剂和耗材
• 4.1.4 主要仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 细胞凋亡的形态学观察
• 4.2.2 流式细胞术分析
• 4.2.3 协同抗肿瘤效应分析
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 海龙蛋白对肿瘤细胞凋亡的诱导作用
• 4.3.2 海龙蛋白与化疗药物的协同效应
• 4.4 小结与讨论
• 第五章 海龙蛋白的急性毒性及其体内有效性初步研究
• 5.1 实验材料与仪器
• 5.1.1 实验材料与试剂
• 5.1.2 实验动物
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 急性毒性实验
• 5.2.2 海龙蛋白对 S180 肉瘤小鼠的影响
• 5.2.3 海龙蛋白对EAC 艾氏癌腹水型肿瘤小鼠的影响
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 海龙蛋白的急性毒性
• 5.3.2 海龙蛋白对S180 实体型肿瘤小鼠的影响
• 5.3.3 海龙蛋白对EAC 艾氏癌腹水型肿瘤小鼠的影响
• 5.4 小结与讨论
• 结论
• 总结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 攻读学位期间发表的学术论文