大蒜素对大鼠心肌细胞缺氧/复氧、缺血/再灌注损伤保护作用及其机制研究

论文摘要

第一部分大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响目的探讨大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并观察大蒜素对心肌细胞凋亡的影响。方法利用培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧（A/R）模型,将培养的心肌细胞分为正常对照（CON）组、缺氧预处理（AP）组、缺氧/复氧（A/R）组、大蒜素（A）组共4组。各组均测定缺氧后、复氧后心肌细胞损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记法（TUNEL法）共聚焦荧光显微镜检测各组心肌细胞凋亡,并计算凋亡指数（AI）,比较各组间差异。结果A组、AP组较A/R组LDH、MDA明显降低,SOD明显增高;A/R、AP、A组AI较CON组明显增高,AP组、A组AI较A/R组降低有显著性差异,A组较AP组AI稍高,但无显著统计学差异。结论大蒜素具有明显抗心肌细胞A/R损伤作用,并具有明显的抗心肌细胞凋亡作用。第二部分大蒜素预处理对大鼠心脏缺血/再灌注损伤起保护作用及其机制探讨目的第一部分证实大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,本部分进一步探讨在活体大鼠心脏缺血/再灌注（I/R）损伤模型中大蒜素是否具有抗缺血/再灌注损伤及抗心肌细胞凋亡作用。并进一步探讨丝裂素活化蛋白激酶p38（p38MAPK）是否参与大蒜素对大鼠心肌细胞I/R损伤的保护作用。方法建立在体大鼠心脏I/R损伤模型,将69只大鼠随机分为正常对照组（CON组,n=9）、I/R损伤组（I/R组,n=15）、大蒜素预处理组（A组,n=15）、大蒜素预处理+SB203580组（A+SB组,n=15）、SB203580组（SB组,n=15）;各组均测定大鼠心肌I/R损伤后血清肌酸磷酸肌酶同工酶MB（CK-MB）、心肌组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（S0D）含量,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞及凋亡指数（AI）,除CON组外余各组均测定心肌梗死范围（IS/AAR%,TTC法）,并利用蛋白免疫沉淀法（westernblotting）测定各组缺血区心肌总p38MAPK、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）表达情况,比较各组间差异。结果A组较I/R组、A+SB、SB组IS/AAR%[（21.85±1.49）% vs.（44.65±4.65）%,（41.17±3.16）%,（40.98±7.62）%,均P<0.01]、CK-MB[（986.40±94.01）U/L vs.（2044.25±107.28）U/L,（2004.75±206.43）U/L,（2044.33±144.13）U/L,均P<0.01)]、MDA [（3.26±0.35）nmol/mg pro vs.（4.96±0.46）nmol/mgpro, （4.79±0.41）nmol/mg pro,（4.75±0.35）nmol/mg pro,均P<0.01)]均明显降低,SOD[（140.20±12.89）U/mg pro vs.（73.16±11.22）U/mg pro,（73.93+8.46）U/mg pro,（74.35+4.66）U/mg pro,均P<0.01)]明显增高。A组较I/R组、A+SB、SB组AI明显降低[（6.97±1.23）%vs. （13.99±3.05）%,（13.55±2.54）%,（14.16±3.70）%,均P<0.01],p-p38MAPK表达在A组较I/R、A+SB、SB组明显增高,总p38MAPK在各组间无显著性差异。结论大蒜素有明显抗在体大鼠心肌I/R损伤、抗心肌细胞凋亡作用,其作用与p38MAPK细胞信号转导通路有关。第三部分大蒜素调控Bcl-2,Bax蛋白表达及NF-κB核结合活性减少缺血/再灌注诱导的细胞凋亡目的前二部分实验证实大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤及活体大鼠缺血/再灌注损伤模型中均具有心肌细胞保护作用,在此部分进一步探讨Bcl-2,Bax蛋白表达及NF-κB核结合活性变化在大蒜素对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用及抗缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡中的作用。方法利用第二部分实验中正常对照组（CON组,n=6）、缺血/再灌注损伤组（I/R组,n=6）、大蒜素预处理组（A组,n=6）之大鼠心脏;常规进行石蜡切片后使用免疫组化方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达,同时利用心肌组织进行电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB的核结合活性,比较各组间差异。结果A组较工/R组Bcl-2表达明显增加,Bax明显减少。以PEI半定量:与CON组比较,I/R组Bcl-2表达显著减弱（1.30±0.19 vs.1.54±0.19,P<0.01）,与I/R组相比,A组Bcl-2表达显著增加（1.30±0.19 vs.5.47±0.49,P<0.01）,而Bax表达在I/R组较A组显著增加（6.10±0.90 vs.1.80±0.22,P<0.01）。以光密度半定量表达NF-κB DNA结合活性:I/R、A组分别是CON组的2.36、1.36倍,A组较I/R组亦显著减弱（P<0.01）。结论大蒜素有明显抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤作用,其作用机制与抗心肌细胞凋亡作用有关,对Bcl-2,Bax蛋白表达及NF-κ核结合活性的不同调控起到重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 大蒜素预处理对大鼠心脏缺血/再灌注损伤保护作用及其机制探讨
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 大蒜素调控Bcl-2,Bax蛋白表达及NF-κB核结合活性减少缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 附录一 英文缩略词表
• 附录二 攻读博士学位期间发表的论文
• 致谢