芍芪多苷的研制及其对大鼠化学性肝纤维化的作用和促进胶原代谢的分子机制

论文题目: 芍芪多苷的研制及其对大鼠化学性肝纤维化的作用和促进胶原代谢的分子机制

论文类型: 博士论文

论文专业: 药理学

作者: 桂双英

导师: 魏伟

关键词: 芍芪多苷,肝纤维化,细胞外基质,肝星状细胞,基质金属蛋白酶,组织金属蛋白酶抑制因子,蛋白

文献来源: 安徽医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是大多数慢性肝病所共有的病理特征,是肝脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和降解失衡、导致其过度沉积的结果,也是慢性肝炎进一步向肝硬化、肝癌发展的重要环节。近年来的研究证实HF在未进入肝硬化之前,尚有逆转可能,因此预防和逆转HF对慢性肝病、肝硬化等治疗有积极意义。但HF的形成是一个复杂的过程,目前用于治疗或逆转HF的方法大多效果不理想或长期应用不良反应较大。因此,探究HF的发病机制,并在中医药领域寻找高效低毒、能控制HF病情的新药是当前研究的重要方向。白芍和黄芪是中医临床常用的保肝药物,尤其是益气活血、养血柔肝方剂的主要组份。本实验采用均匀设计法优选出白芍和黄芪的最佳剂量配比后,运用现代提取分离技术制得白芍和黄芪复方的芍芪多苷有效部位群(shaoqiduogan,SQDG);在大鼠化学性HF模型上,探讨SQDG对大鼠HF的治疗作用及其特点;并从细胞因子、胶原代谢相关酶的蛋白表达水平等方面研究SQDG治疗大鼠HF的可能机制,从而为抗HF中药新药——SQDG制剂的进一步开发奠定基础。 目的:研究SQDG有效部位群的制备工艺,并建立相应的质量控制方法;从大鼠肝功能的改变、反映胶原水平的血清和肝脏指标及肝脏病理形态学等的改变,明确SQDG对大鼠HF的治疗作用;从细胞因子、胶原代谢相关酶等方面研究SQDG

论文目录:

英文缩略词表

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实验研究

实验一：芍芪多苷的制备工艺和质量研究

1.前言

2.实验材料

2.1 药材与试剂

2.2 仪器与设备

2.3 动物

3.实验方法

3.1 白芍和黄芪最佳剂量配比研究

3.1.1 均匀设计分组

3.1.2 动物造模与给药方法

3.1.3 数据统计与分析

3.1.4 药材配比验证试验

3.2 SQDG制备工艺研究

3.2.1 SQDG提取工艺研究

3.2.2 SQDG大孔树脂纯化工艺的研究

3.3 SQDG质量研究

3.3.1 TLC鉴别研究

3.3.2 含量测定

4.实验结果

4.1 白芍和黄芪的最佳剂量配比研究

4.1.1 白芍和黄芪的最佳剂量配比

4.1.2 最佳剂量配比验证试验

4.2 SQDG的制备工艺研究

4.2.1 SQDG提取工艺优选

4.2.2 SQDG大孔树脂纯化工艺的研究

4.3 SQDG的质量研究

4.3.1 TLC鉴别研究

4.3.2 含量测定

5.讨论

5.1 白芍和黄芪抗急性肝损伤的最佳配比为4：1

5.2 大孔吸附树脂纯化新技术的应用是SQDG制备的关键

5.3 科学的质量控制体系的建立是开发研究SQDG的保证

6.小结

7.参考文献

实验二 芍芪多苷对大鼠化学性肝纤维化的作用及其促进胶原代谢的分子机制

1.前言

2.实验材料

2.1 动物与细胞株

2.2 药物与试剂

2.3 仪器与设备

3.实验方法

3.1 SQDG对大鼠化学性HF的治疗作用

3.1.1 大鼠化学性HF模型诱导

3.1.2 动物分组、给药方案与标本收集处理

3.1.3 ALT、AST活性及A／G的测定

3.1.4 血清HA含量的测定

3.1.5 血清PCⅢ含量的测定

3.1.6 血清C-Ⅰ含量的测定

3.1.7 肝组织Hyp含量测定

3.1.8 血清TGF-β1水平的测定

3.1.9 病理组织学观察及评分标准

3.1.10 肝脏病理免疫组织化学染色检测

3.2 SQDG对HSC-T6细胞胶原代谢的影响

3.2.1 SQDG对HSC-T6细胞产生胶原的影响

3.2.2 SQDG对HSC-T6 cells产生MMP-13、TIMP-1的影响

3.3 SQDG对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞Gαi2、Gαs蛋白、胶原降解相关酶及胶原表达的调控

3.3.1 细胞样品制备

3.3.2 蛋白提取

3.3.3 Western-blot法检测

3.4 统计处理

4.实验结果

4.1 SQDG对大鼠化学性HF的治疗作用

4.1.1 对HF大鼠肝、脾指数的影响

4.1.2 对HF大鼠血清ALT、AST、A／G的影响

4.1.3 对HF大鼠血清HA、PCⅢ和C-Ⅰ水平的影响

4.1.4 对HF大鼠肝匀浆Hyp含量的影响

4.1.5 对HF大鼠血清TGF-β1水平的影响

4.1.6 对HF大鼠肝肝脏病理组织学的影响

4.1.7 大鼠肝脏TGF-β1、MMP-13、TIMP-1及C-Ⅰ的免疫组化

4.2 SQDG对HSC-T6细胞胶原代谢的影响

4.2.1 SQDG对HSC-T6细胞胶原合成的影响

4.2.2 SQDG对TGF-β1刺激的HSC-T6细胞产生MMP-13、TIMP-1的影响

4.3 SQDG对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞Gi2、Gs、MMP-13、TIMP-1、C-Ⅰ表达水平变化的影响

5.讨论

5.1 SQDG对CCl4诱导的大鼠HF具有保护作用

5.2 降低化学性HF大鼠体内TGF-β1水平是SQDG抗HF的主要特点之一

5.3 影响胶原降解酶及其抑制剂的合成是SQDG抗HF的重要机制之一

5.4 SQDG可能通过调节HSC的Gαi2和Gαs的表达而影响胶原降解酶水平，发挥降解胶原的作用

6.小结

7.课题总结

8.参考文献

附录

致谢

综述：肝纤维化发生机制及治疗的研究进展

发布时间: 2005-09-07

参考文献

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• [3].芍药苷抗抑郁促动力作用的实验研究[D]. 穆道周.南京中医药大学2016
• [4].枫寥肠胃康对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠动力及氯离子分泌的影响[D]. 王跃旗.北京中医药大学2017
• [5].益气血法通过调节GDF9分泌对大鼠超排卵卵丘细胞凋亡的影响及其作用机制研究[D]. 杨贞.广州中医药大学2017
• [6].大黄及其活性物质灌肠对慢性肾脏病模型大鼠作用的分子机制[D]. 曾玉群.广州中医药大学2017
• [7].基于BDNF/JAK2/STAT3/GABA_AR通路探讨疏肝健脾方对肝郁脾虚IBS-D大鼠的作用机制[D]. 黄育生.广州中医药大学2017
• [8].自拟菖蒲郁金汤对多发性抽动症模型大鼠单胺类神经递质及多巴胺系统的影响[D]. 高汉媛.甘肃中医药大学2017
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• [10].大黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制研究[D]. 黄四周.福建中医药大学2018

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• [6].木苏丸对实验性肝纤维化的防治、作用机制研究及临床观察[D]. 高峰.中国人民解放军军医进修学院2005
• [7].白芍总苷抗肝纤维化作用及其对肝星状细胞G蛋白偶联信号转导的影响[D]. 王华.安徽医科大学2005
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