NG2蛋白聚糖糖链生物活性研究夜交藤抑制MMPs改变细胞行为

论文摘要

蛋白聚糖NG2可以传递信号,引起细胞骨架的重排,导致细胞的伸展和迁移。NG2分子的硫酸软骨素链（CS-GAG）组分对NG2生物活性的影响尚不清楚。运用生物化学和分子生物学方法,通过基因工程手段缺失大鼠野生型NG2中的CS-GAG组分,将野生型NG2和缺失CS-GAG链的突变型NG2基因分别转染进人成胶质瘤细胞U251中表达,监测了NG2参与的细胞伸展和迁移过程,揭示NG2分子中CS-GAG链对NG2介导的转染细胞伸展和迁移的影响。结果显示表达NG2可以显著增强细胞的伸展和迁移能力,去除NG2中硫酸软骨素长链降低了NG2转染的U251细胞的伸展和迁移能力,说明NG2中硫酸软骨素链对由于NG2表达引起的细胞伸展和迁移能力的增高有一定的调节作用。基质金属蛋白酶（MMPs）是一类Zn2+依赖的内肽酶家族,在正常和病理情况下的细胞外基质（ECM）的重塑过程中发挥重要的作用。MMPs在肿瘤细胞的生长、浸润、转移、肿瘤血管新生和细胞凋亡中的关键作用已被确立。以MMPs为分子靶标,针对中药夜交藤提取物,应用酶学、生物化学、天然药物化学和细胞生物学等方法探讨了中药夜交藤多种提取物组分对MMPs的抑制作用。结果表明夜交藤的乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和最终的水层提取物对MMP-9、MMP-14和MMP-16都有抑制作用,正丁醇提取物和水层提取物能够抑制三维培养的HT1080人纤维肉瘤细胞伪足形成,水层提取物抑制了HT1080细胞的浸润,这一工作的重要意义在于通过对活性抑制产物的分离和鉴定,有利于药性作用机理的解释,有希望寻找到有效MMPI的先导化合物,有助于以MMPs为治疗靶点的新药研发。

论文目录

• 内容提要
• 第一篇 NG2 蛋白聚糖糖链生物活性研究
• 第一章 前言
• 1.1 细胞外基质
• 1.2 蛋白聚糖
• 1.3 硫酸软骨素蛋白聚糖（NG2 PROTEOGLYCAN）
• 1.3.1 NG2 在不同的细胞体系中表达形式
• 1.3.2 NG2 的功能
• 1.4 NG2 和MMPS
• 第二章 实验材料和方法
• 2.1 CDNA 的构建和转染
• 2.1.1 主要实验材料
• 2.1.2 主要实验仪器
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 转染细胞U251 的细胞行为学实验
• 2.2.1 主要实验材料
• 2.2.2 主要实验仪器
• 2.2.3 实验方法
• 第三章 实验结果和讨论
• 3.1 CDNA 的构建和转染
• 3.1.1 突变型NG2 cDNA 的构建及鉴定
• 3.1.2 转染U251 细胞表达的鉴定
• 3.2 细胞行为学及分析
• 3.3 讨论
• 结论
• 第二篇 夜交藤抑制MMPS 改变细胞行为
• 第一章 前言
• 1.1 基质金属蛋白酶（MATRIX METALLOPROTEINASES，MMPS）
• 1.1.1 MMPs 的结构
• 1.1.2 MMPs 活性的内源性调节
• 1.1.3 MMPs 的功能
• 1.2 基质金属蛋白酶抑制剂（MMP INHIBITOR，MMPI）
• 1.2.1 组织中分泌的天然基质金属蛋白酶抑制剂
• 1.2.2 化学合成的基质金属蛋白酶抑制剂
• 1.2.3 天然产物中基质金属蛋白酶抑制剂
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.2 样品制备方法
• 2.3 酶学检测
• 2.3.1 试剂
• 2.3.2 仪器
• 2.3.3 主要溶液配制方法
• 2.4 检测方法
• 2.4.1 酶学方法
• 2.4.2 酶谱方法
• 2.5 细胞行为学检测
• 2.5.1 试剂
• 2.5.2 仪器
• 2.5.3 检测方法
• 第三章 实验结果与讨论
• 3.1 夜交藤（POLYGONI MULTIFLORI CAULIS）简介
• 3.2 夜交藤对MMPS 的抑制作用
• 3.3 夜交藤对细胞存活率和细胞形态的影响
• 3.4 夜交藤水层对HT1080 细胞侵袭的影响
• 总结
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表论文
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢