桦褐孔菌液体发酵工艺及其多糖抗疲劳的研究

论文摘要

桦褐孔菌是一种名贵的药用菌。多糖是桦褐孔菌最重要的活性成分之一,具有抗肿瘤、降血糖、抗病毒、降血脂、增强免疫、抗氧化、抗血栓、抗炎止痛等药理活性。桦褐孔菌野生资源有限,子实体人工栽培技术尚未成熟,因此通过液体发酵获取多糖就显得尤为重要。本研究筛选出适合液体发酵的桦褐孔菌菌株,对该菌株进行深层发酵培养优化,达到发酵高产粗多糖的目的；并研究了该多糖对小鼠的抗疲劳的功效。主要结果如下：1 比较桦褐孔菌1号、2号菌株的菌丝平板长速、液体发酵培养胞内外粗多糖产量,桦褐孔菌1号菌株在平板中的长速及在药用菌通用液体培养基中的长势和产量都较好,其平板长速是2号菌种的1.872倍,菌丝体干重是2号菌种的1.254倍,粗多糖产量是2号菌种的1.167倍,而且不易变褐老化,是适合液体深层发酵的菌种。2通过液体深层培养,以桦褐孔菌胞内外粗多糖产量为指标,采用单因素考察和正交试验相结合的方法,研究培养基的组分、培养条件对桦褐孔菌产多糖的影响。最适培养基为：玉米粉20g/L、葡萄糖15g/L、麸皮30g/L、酵母粉3g/L、KH2PO4 1g/L、MgSO4 · 7H2O 0.5g/L、VB1 0.005g/L。正交实验的最佳培养条件为：温度30℃、转速140r/min、起始pH6、培养时间12d,接种量12.5%,种龄7d,桦褐孔菌的粗多糖产量达0.511g/100mL。3用优化培养基培养出桦褐孔菌胞内多糖IO-P1、胞外多糖I0-P2,用优化培养基加入桦木屑浸出液培养出桦褐孔菌胞内多糖IO-P3、胞外多糖I0-P4,通过构建小鼠疲劳模型研究桦褐孔菌多糖对小鼠的抗疲劳作用。桦褐孔菌多糖各剂量组对实验小鼠体重变化均无明显影响。“IO-P3高剂量组”延长游泳时间的效果最好,力竭游泳时间比对照组显著提高了52.8%（P<0.05）；“IO-P3高剂量组”降低血清尿素氮的效果最好,小鼠血清尿素氮含量比对照组显著降低了31.3%（P<0.05）；“IO-P3高剂量组”降低血乳酸的效果最好,血乳酸曲线下面积与对照组比较显著降低了41.3%（P<0.05）：“IO-P3高剂量组”提高肝糖原水平的效果最好,小鼠肝糖原含量比对照组显著提高了30.6%（P<0.05）；说明桦褐孔菌多糖具有较好的延缓疲劳效果。用含桦木屑培养基培养出的桦褐孔菌胞内多糖I0-P3与无桦木屑培养基培养出的桦褐孔菌胞内多糖I0-P1之间的各指标值无显著性差异（P>0.05）,用含桦木屑培养基培养出的桦褐孔菌胞外多糖IO-P4与无桦木屑培养基培养出的桦褐孔菌胞外多糖I0-P2之间的各指标值也无显著性差异（P>0.05）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 一、综述
• 1 形态结构及其生境
• 2 桦褐孔菌的生物活性成分
• 3 桦褐孔菌的药理作用
• 4 桦褐孔菌的开发利用
• 5 桦褐孔菌菌丝体人工培养条件的研究
• 6 本课题的研究目的及意义
• 二、桦褐孔菌菌株筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基配方
• 1.3 仪器、药品、材料
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 菌种的活化
• 1.4.2 菌丝长速测定试验
• 1.4.3 菌种间的拮抗试验
• 1.4.4 液体培养筛选
• 1.4.5 菌丝体干重及胞内外多糖的提取及含量测定
• 1.4.5.1 菌丝体干重测定
• 1.4.5.2 胞内胞外粗多糖提取
• 1.4.5.3 多糖含量测定——苯酚-硫酸法
• 2 结果与分析
• 2.1 菌丝长速测定试验
• 2.2 菌种间的拮抗试验
• 2.3 不同桦褐孔菌菌株的发酵筛选
• 3 结论与讨论
• 三、桦褐孔菌深层发酵培养基条件的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基配方
• 1.2.1 不同氮源对桦褐孔菌生长的影响
• 1.2.2 不同碳源对桦褐孔菌生长的影响
• 1.2.3 正交实验
• 1.3 仪器、药品、材料
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 不同氮源对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.2 不同碳源对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.3 正交实验
• 2 结果与分析
• 2.1 不同氮源对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.2 不同碳源对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.3 正交实验
• 3 结论与讨论
• 四、桦褐孔菌深层发酵培养条件的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基配方
• 1.3 仪器、药品、材料
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 pH对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.2 转速对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.3 温度对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.4 种龄对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.5 接种量对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.6 发酵天数对桦褐孔菌粗多糖产量的影响
• 1.4.7 正交实验
• 2 结果与分析
• 2.1 不同初始pH对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.2 转速对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.3 温度对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.4 种龄对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.5 接种量对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.6 发酵天数对桦褐孔菌产多糖的影响
• 2.7 正交实验
• 3 结论与讨论
• 五、桦褐孔菌粗多糖的抗疲劳作用研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 供试样品
• 1.1.2 受试动物
• 1.1.3 仪器和试剂
• 1.1.3.1 主要仪器设备
• 1.1.3.2 主要试剂和药品
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 实验动物分组与多糖剂量设定
• 1.2.2 负重游泳试验及游泳时间的测定
• 1.2.3 血清尿素氮（BUN）的测定
• 1.2.4 血乳酸（BLA）的测定
• 1.2.5 肝糖原的测定
• 1.2.6 实验数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 对小鼠负重游泳时间的影响
• 2.2 对小鼠血清尿素氮（BUN）的影响
• 2.3 对小鼠血乳酸（BLA）的影响
• 2.4 对小鼠肝糖原的影响
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 致谢