PTEN基因在食管鳞癌中表达和突变的研究

论文摘要

背景和目的PTEN基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten）是迄今发现的第一个具有双磷酸酶活性的抑癌基因,其定位于染色体10。它通过其具有的双磷酸酶活性对多条细胞信号传导通路进行去磷酸化调节,以达到对细胞生长的负调控。它的主要功能为诱导细胞凋亡、抑制细胞生长、抑制细胞迁移和黏附以及参与胚胎正常发育及维护免疫系统稳定性。研究发现PTEN在很多肿瘤中存在丢失或低表达,尤其在子宫内膜癌,前列腺癌,神经胶母细胞瘤和黑色素瘤等恶性肿瘤中突变率更高。当前已证实PTEN基因的突变、失活与肿瘤的发生发展密切相关。食管鳞癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,尤其在河南省林州市,食管鳞癌的发生率和死亡率均很高。有关PTEN与食管鳞癌的研究尚不多见。本实验主要检测食管鳞癌细胞系EC9706、ECa109和ECl中PTEN mRNA的表达水平及PTEN基因是否存在突变。为探讨PTEN基因在食管鳞癌发生发展中的作用机制及食管鳞癌的基因诊断和治疗提供实验依据。1.采用半定量RT-PCR方法检测三株食管鳞癌EC9706,ECa109和EC1细胞PTEN mRNA的表达。2.分别从食管鳞癌细胞系EC9706、ECa109和EC1中提取总RNA,反转录为cDNA,然后设计引物扩增PTEN全长,将其与pMD18-T载体连接并送测序,获得的PTEN基因序列通过Blast与野生型PTEN对比,以检测是否存在突变并对其进行分析。3.统计学处理RT-PCR结果均采用BandScan5.0进行灰度分析,试验重复三次。统计学处理均采用SPSS13.0统计软件,统计学数据用均数±标准差表示,行单因素方差分析,P<0.05具有显著性。1.三株食管鳞癌细胞中均有PTEN mRNA的表达,其中高分化ECa109细胞株中PTEN mRNA的表达明显高于低分化EC9706和EC1细胞株（P<0.01）。2.EC9706 PTEN在第2、5、6和8外显子均存在突变,ECa109 PTEN在第5、8和9外显子存在突变,EC1在第6、8和9外显子存在突变,三种细胞突变多集中在第5、8、9外显子,且突变类型为错义突变和无义突变。三种细胞株PTEN突变均导致其编码的氨基酸序列改变。1.三株食管鳞癌细胞中均存在PTEN mRNA的表达,并且食管癌中PTEN的表达与肿瘤的分化程度有关,高分化癌细胞中PTEN mRNA的表达明显高于低分化癌细胞。2.食管鳞癌细胞株中确实存在PTEN基因的突变,突变热点集中在两个重要的功能区第5、8外显子区,为错义突变和无义突变,并导致编码的氨基酸突变。提示食管鳞癌细胞中PTEN基因结构功能区的突变将影响PTEN蛋白功能,PTEN突变在食管鳞癌的发生发展中起着重要的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• PTEN基因在食管鳞癌中表达和突变的研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 5 实验结论
• 6 参考文献
• PTEN基因在恶性肿瘤中的研究进展
• 参考文献
• 缩略词表
• 致谢
• 个人简历及攻读硕士期间发表论文
• 附录