导读:本文包含了中国仓鼠卵巢细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:中国仓鼠卵巢细胞,定点整合,CRISPR,Cas9,蛋白质表达
中国仓鼠卵巢细胞论文文献综述
周松涛,陈蕴,龚笑海,金坚,李华钟[1]（2019）在《利用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达人白蛋白基因的中国仓鼠卵巢细胞系》一文中研究指出通过目的基因的随机整合方式,构建得到的CHO表达细胞系,常会因为目的基因插入到染色体内不稳定区域,而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象,这主要是由于位点效应所导致的。为了解决这个问题,现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组,将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上的稳定表达区域,以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定。利用该技术总共获得了2株外源基因(人白蛋白基因)定点整合细胞系; Western blot结果显示,细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性;细胞在贴壁状态下,两株细胞系在第3、12、23、35、50代,细胞每日表达的HSA质量接近,且均维持在0. 5pg cell/d;选取一株表达细胞系,经悬浮驯化后,在批次条件培养下,第1、25、50代的悬浮细胞,在摇瓶内的表达浓度均稳定在13～14mg/L。显示了将外源基因定点整合于CHO细胞基因组内的可行性;且外源基因整合在稳定表达区域后,重组细胞系具有对外源基因长期表达的稳定性。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年04期）
刘宴娟,祁爱蓉,路遥,李顺民[2]（2019）在《雷公藤甲素对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响及黄体酮的干预效果》一文中研究指出目的探讨雷公藤甲素对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡的影响及黄体酮的干预效果。方法将CHO细胞分为对照组、雷公藤甲素组、黄体酮组、雷公藤甲素+黄体酮组,分别给予等量培养液、0. 05μg/μl雷公藤甲素、0. 05μg/μl黄体酮、0. 05μg/μl雷公藤甲素联合0. 05μg/μl黄体酮干预。分别于干预后6 h及12 h检测4组CHO细胞凋亡率、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化及即早基因c-fos表达水平。结果雷公藤甲素组干预后6 h及12 h的细胞凋亡率均高于对照组和黄体酮组(均P <0. 05),但两个时间点的细胞凋亡率差异无统计学意义(P> 0. 05)。雷公藤甲素+黄体酮组干预后6 h的细胞凋亡率高于对照组和黄体酮组,而低于雷公藤甲素组(均P <0. 05),且干预后12 h的细胞凋亡率低于干预后6 h(P <0. 05)。雷公藤甲素组的ERK磷酸化水平低于对照组,c-fos水平高于对照组,雷公藤甲素+黄体酮组的ERK磷酸化水平和c-fos水平均低于对照组和雷公藤甲素组(均P <0. 05)。结论雷公藤甲素可促进CHO细胞凋亡,可能与其引起ERK/c-fos异常表达有关,但干预时间延长并不增加细胞凋亡程度。黄体酮对雷公藤甲素所致仓鼠卵巢细胞损害具有保护功能。(本文来源于《广西医学》期刊2019年03期）
钱浩诚,蒋晨旻,陈华才,沈立荣[3]（2018）在《王浆主蛋白作为胎牛血清替代物培养中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1的效果及作用机制》一文中研究指出用王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs)部分代替胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO-K1),比较添加不同MRJPs/FBS(M/F)比例的培养基对细胞相对增殖率的影响。四唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)结果显示:当M/F比例为50/50时对细胞的促增殖作用最显着;与完全培养基对照组(M/F 0/100)相比,培养48与72 h时的相对活细胞数分别上升了25.1%和13.6%。细胞成像仪分析表明,M/F 50/50培养基的细胞密度最高,其细胞直径显着大于完全培养基对照组。流式细胞仪结果显示,与完全培养基对照组相比,M/F 50/50培养基中的细胞增殖指数(proliferation index,PI)提高了19.4%,推测MRJPs的促细胞增殖作用可能与DNA、蛋白质及酶的合成有关。拉曼光谱检测结果显示,各处理组培养基的细胞光谱图之间没有显着差异,说明MRJPs在促进细胞增殖的同时维持了细胞的稳定性。以上结果证明,MRJPs可以部分替代FBS培养生物医药产业中应用广泛的CHO-K1细胞,降低细胞培养成本,具有产业化前景,并为蜂王浆深加工提供新的用途。(本文来源于《浙江大学学报(农业与生命科学版)》期刊2018年01期）
赵永强[4]（2017）在《基于中国仓鼠卵巢细胞表达的Fc融合蛋白的制备及表征》一文中研究指出Fc融合蛋白是指将目标生物活性的蛋白质或多肽分子,利用基因工程等技术手段,与免疫球蛋白G(Immunoglobulin,IgG)结构的Fc片段进行融合,产生新的由目标物与IgG融合组成的基因重组蛋白。解决Fc融合蛋白药物的制备工艺中一些关键工艺步骤的问题,对于此类药物的开发应用具有十分重要的意义。本文以本实验室构建的一株表达Fc融合蛋白的CHO细胞为对象,探索上游细胞培养工艺中的培养基优化和补料策略优化,以及下游纯化工艺中的Protein A亲和层析和阴离子交换层析步骤的优化,具体研究结果如下:1.通过摇瓶培养的方式,进行培养基的混合配方试验。用于混合筛选的培养基为商品化的适宜CHO细胞生长的培养基。在考察细胞生长与表达的同时,兼顾降低成本。结果为:以种子培养基(Mab-WorksmediumC):基础培养基(CDOptiCHO)=1:1的比例配方,比单一使用种子培养基培养的细胞密度提高了 161.8%,蛋白表达量提高了 100%;为考虑降低培养基成本而进一步设计的试验,则获得了种子培养基(Mab-WorksmediumC):基础培养基(CDOptiCHO):基础培养基(CDM4Mab)=2:1:1的比例配方,相比于种子培养基:基础培养基(CDOptiCHO)=1:1比例的混合配方进行细胞培养,细胞密度高出13.3%,蛋白表达量高出18.1%,还可以降低成本25%,并能维持较好的活率;2.针对抗体类生物药(包括Fc融合蛋白)通用的Fed-Batch培养方式,进行补料方案的研究。发现:流加策略中流加方案二(流加培养基量为终体积的30%,平均至第3、6、9天流加)优于流加方案一(流加培养基量为终体积的30%,平均至第2、4、6、8天流加),细胞密度高出30.9%,蛋白表达量高出13.2%;3.在5L生物反应器规模,充分利用反应器的精准参数控制功能,对摇瓶试验的结果成功进行了放大;4.对细胞收获液的亲和层析工艺进行探索,得出结果:pH值为3.3的洗脱条件适合本实验的Fc融合蛋白Protein A亲和层析步骤,此条件下获得了最高的纯度98.64%,同时收率较好达到94.7%;5.针对离子交换步骤的条件优化繁琐问题,从目标蛋白等电点测定到工艺中的缓冲液pH值、电导率对纯化效果的影响进行研究,结果发现:在电导率2 mS/cm的较低水平下,本试验蛋白在pH值5.0～5.5之间时阴离子纯化效果最好。(本文来源于《中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)》期刊2017-12-01）
陈思佳,赵春澎,张俊河,王小引,王天云[5]（2017）在《富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因表达的影响及其位置效应》一文中研究指出目的分析富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中转基因表达水平的影响及其位置效应。方法人工合成富含GC的DNA片段,将其克隆到表达载体的表达盒的5'、3'端及两端,构建在载体不同位置插入富含GC DNA片段的3个新表达载体(p IRES-G1、p IRES-G2和p IRES-G3),分别转染CHO细胞并用荧光显微镜进行观察;对照载体为p IRES-EGFP。采用G418筛选稳定细胞株,流式细胞术分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测其转基因拷贝数。结果成功构建了在载体不同位置含有GC DNA片段的3个载体,瞬时及稳定转染结果显示,在载体表达盒两端及3'端插入富含GC DNA片段能够明显提高EGFP在CHO细胞中的表达水平。与对照载体比较,稳定表达情况下载体表达盒两端及3'端插入富含GC DNA能分别提高转基因表达水平约1.39、1.32倍,而在5'端插入富含GC DNA片断对于提高基因表达水平作用尚不明显。表达盒两端及3'端插入富含GC DNA片段的转基因拷贝数比对照载体提高了约1.32、1.24倍。结论富含GC的DNA片段在CHO细胞提高转基因表达与其在载体上的位置有关,在载体表达盒两端或3'端插入一段富含GC的DNA片段可以提高转基因表达水平。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2017年09期）
郑雄飞,金坚,龚笑海,李文军,徐栋生[6]（2017）在《骨形态发生蛋白10在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及其生物活性》一文中研究指出目的在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达改造后的骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)全长基因,纯化后检测其生物活性,以期获得具有生物活性的BMP10分子。方法于rh BMP10的propeptide与mature chain基因片段之间插入6×his-tag标签及DDDDK(肠激酶识别位点),构建p MH3-rh BMP10-histag-DDDDK质粒,电转入CHO细胞,用500μg/ml G418从单克隆中筛选出稳定表达目的蛋白的重组细胞,悬浮驯化表达8 d后,收集培养液上清,阴离子交换柱和镍柱纯化目的蛋白。采用q-PCR法检测纯化蛋白的体外细胞活性。结果目的蛋白纯化液经SDS-PAGE检测到的条带相对分子质量与目的蛋白理论值相符,Western blot分析可见相对分子质量约48 000、96 000和190 000的3个条带,与目的蛋白单体及多聚体相对分子质量一致。酶切后的目的蛋白可有效刺激P19细胞的标志蛋白(Smad6)表达上调。结论 BMP10 propeptide的存在对BMP10的蛋白活性具有重要作用,改造后的BMP10在CHO细胞中表达具有一定的生物活性。本研究为全长BMP10活性二聚体的制备提供了新的思路。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2017年03期）
洪文旭,熊法德,曾序春[7]（2017）在《甲基叔丁基醚对斑马鱼及中国仓鼠卵巢细胞的毒性效应》一文中研究指出[目的]研究甲基叔丁基醚(MTBE)对斑马鱼和中国仓鼠卵巢细胞的毒性作用及氧化应激效应,为其科学、合理应用提供依据。[方法]应用半静态试验法研究不同浓度MTBE对斑马鱼的急性毒性效应,以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为模型,分析不同浓度MTBE对CHO细胞增殖水平和氧化应激相关酶活力水平的影响。[结果]MTBE对斑马鱼的48 h LC50值为71.5 mg/L;在细胞试验中,当MTBE暴露浓度高于5.0 mmol/L时,CHO细胞增殖水平受到明显抑制(P<0.05);当MTBE暴露浓度达到50.0 mmol/L时,SOD活力明显上升(P<0.05)。当MTBE浓度达到25.0 mmol/L时,CAT活力达到最大值且与对照组差异显着(P<0.05);当MTBE浓度达到25.0 mmol/L时,CHO处理组GSH-Px活力明显上升(P<0.05)。[结论]MTBE暴露可以诱导斑马鱼和CHO细胞的毒性作用,而氧化应激酶活力水平的改变可能是MTBE毒性作用之一。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2017年02期）
蒋雪薇,王军,朱双,孙英杰,朱晓芹[8]（2016）在《斑马鱼胚胎细胞和中国仓鼠卵巢细胞远缘杂交融合条件的优化》一文中研究指出以斑马鱼胚胎细胞(ZEM-2s)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO-k1)为实验材料,采用聚乙二醇(PEG)作为促融剂,从PEG的相对分子质量、浓度、作用温度和时间等方面进行单因子实验,以期寻找两种细胞融合的最佳条件。实验结果表明,融合的最适条件是融合温度为37℃,浓度为40%,分子量为2 000的PEG处理斑马鱼胚胎细胞和中国仓鼠卵巢细胞100sec,平均融合率高达25.3%,与未加入PEG的细胞相比,最佳条件下处理的两种细胞融合现象明显(p<0.05),表明该条件下的处理能够显着促进细胞的融合。(本文来源于《氨基酸和生物资源》期刊2016年03期）
王喜成,贾岩龙,郭潇,张玺,王天云[9]（2016）在《巨细胞病毒和猴空泡病毒40启动子在中国仓鼠卵巢细胞中驱动基因表达效率比较》一文中研究指出目的比较巨细胞病毒(CMV)和猴空泡病毒40(SV40)2种启动子驱动外源基因在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞CHO-K1中的表达效率。方法分别构建由CMV和SV40启动子驱动表达绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pWTY-02和pWTY-03。用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将表达载体质粒分别转染CHO-K1细胞,倒置荧光显微镜观察转染后CHO-K1细胞中EGFP的表达情况;流式细胞术检测EGFP的荧光强度,以比较2种启动子驱动外源基因表达的效率。结果 2种启动子均能够驱动EGFP在CHO-K1细胞中表达。转染质粒pWTY-02的CHOK1细胞的平均荧光强度明显高于转染质粒pWTY-03的CHO-K1细胞(P<0.05)。结论 CMV启动子在CHO-K1细胞中驱动EGFP的表达效率较高,为后续CHO表达系统中提高外源基因表达效率启动子的选择提供了依据。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2016年07期）
张峰,董衍东,郭莎,高凯,王兰[10]（2016）在《3种中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量检测试剂盒的比较研究》一文中研究指出目的比较市售3种中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量ELISA检测试剂盒(货号:A、B、C)的检测效果。方法分别使用3种试剂盒检测不同CHO细胞株表达的治疗性单抗原液、提取CHOK1细胞培养上清蛋白和3种CHO-HCP检测试剂盒自带CHO-HCP标准品,评价3种试剂盒的检测效果。将3种试剂盒的包被板与酶标二抗系列组合后,检测标准品和提取的CHO-K1细胞培养上清蛋白分析产生差异的原因。结果单抗样品检测中,试剂盒A、B相对于试剂盒C的检测回收率约为1.89%和15.34%;CHO-K1细胞培养上清蛋白样品检测中,试剂盒A、B、C的回收率分别为:4.05%、21.52%和35.98%;试剂盒标准品互测中,3种试剂盒检测自身标准品的回收率均在(100±15)%内;试剂盒A检标准品B、C的平均回收率分别为1.28%和7.99%。试剂盒B检测标准品A、C的平均回收率分别为55.76%和25.08%。试剂盒C检测标准品A、B的平均回收率分别为266.65%和73.31%;通过包被板和酶标二抗的系列组合的检测结果推导:微孔板包被抗体对CHO-HCP的覆盖能力方面:A>C>B;二抗对HCP的覆盖能力方面:B>C>A。结论该企业生产的3种CHO-HCP检测试剂盒中检测效率由高到低依次为C>B>A。(本文来源于《中国药学杂志》期刊2016年13期）
中国仓鼠卵巢细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨雷公藤甲素对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡的影响及黄体酮的干预效果。方法将CHO细胞分为对照组、雷公藤甲素组、黄体酮组、雷公藤甲素+黄体酮组,分别给予等量培养液、0. 05μg/μl雷公藤甲素、0. 05μg/μl黄体酮、0. 05μg/μl雷公藤甲素联合0. 05μg/μl黄体酮干预。分别于干预后6 h及12 h检测4组CHO细胞凋亡率、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化及即早基因c-fos表达水平。结果雷公藤甲素组干预后6 h及12 h的细胞凋亡率均高于对照组和黄体酮组(均P <0. 05),但两个时间点的细胞凋亡率差异无统计学意义(P> 0. 05)。雷公藤甲素+黄体酮组干预后6 h的细胞凋亡率高于对照组和黄体酮组,而低于雷公藤甲素组(均P <0. 05),且干预后12 h的细胞凋亡率低于干预后6 h(P <0. 05)。雷公藤甲素组的ERK磷酸化水平低于对照组,c-fos水平高于对照组,雷公藤甲素+黄体酮组的ERK磷酸化水平和c-fos水平均低于对照组和雷公藤甲素组(均P <0. 05)。结论雷公藤甲素可促进CHO细胞凋亡,可能与其引起ERK/c-fos异常表达有关,但干预时间延长并不增加细胞凋亡程度。黄体酮对雷公藤甲素所致仓鼠卵巢细胞损害具有保护功能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
中国仓鼠卵巢细胞论文参考文献
[1].周松涛,陈蕴,龚笑海,金坚,李华钟.利用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达人白蛋白基因的中国仓鼠卵巢细胞系[J].中国生物工程杂志.2019
[2].刘宴娟,祁爱蓉,路遥,李顺民.雷公藤甲素对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响及黄体酮的干预效果[J].广西医学.2019
[3].钱浩诚,蒋晨旻,陈华才,沈立荣.王浆主蛋白作为胎牛血清替代物培养中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1的效果及作用机制[J].浙江大学学报(农业与生命科学版).2018
[4].赵永强.基于中国仓鼠卵巢细胞表达的Fc融合蛋白的制备及表征[D].中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所).2017
[5].陈思佳,赵春澎,张俊河,王小引,王天云.富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因表达的影响及其位置效应[J].新乡医学院学报.2017
[6].郑雄飞,金坚,龚笑海,李文军,徐栋生.骨形态发生蛋白10在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及其生物活性[J].中国生物制品学杂志.2017
[7].洪文旭,熊法德,曾序春.甲基叔丁基醚对斑马鱼及中国仓鼠卵巢细胞的毒性效应[J].安徽农业科学.2017
[8].蒋雪薇,王军,朱双,孙英杰,朱晓芹.斑马鱼胚胎细胞和中国仓鼠卵巢细胞远缘杂交融合条件的优化[J].氨基酸和生物资源.2016
[9].王喜成,贾岩龙,郭潇,张玺,王天云.巨细胞病毒和猴空泡病毒40启动子在中国仓鼠卵巢细胞中驱动基因表达效率比较[J].新乡医学院学报.2016
[10].张峰,董衍东,郭莎,高凯,王兰.3种中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量检测试剂盒的比较研究[J].中国药学杂志.2016