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钼提高冬小麦抗寒力的生理基础及分子机制

2020-11-22阅读(460)

钼提高冬小麦抗寒力的生理基础及分子机制

论文摘要

钼是植物必需的微量元素之一，钼在植物体内的生理功能主要通过含钼酶来实现。本文在总结国内外植物钼营养和抗寒机理研究进展的基础上，通过土壤培养和营养液培养试验，以冬小麦钼高效品种和钼低效品种为材料，应用生理生化研究法并结合荧光定量PCR技术、双向电泳和质谱分析技术，深入研究了钼提高冬小麦抗寒力的生理基础，初步分析了钼提高冬小麦抗寒力的分子机制。主要研究结果如下：1．研究了在低温胁迫下施钼对冬小麦叶片半致死温度(LT50)、电解质渗透率和丙二醛（MDA）含量的影响。结果表明：随着低温胁迫的延长，2冬小麦品种（97003和97014）施钼处理叶片半致死温度(LT50)均呈一直下降趋势，缺钼处理半致死温度(LT50)先下降后有所回升；低温胁迫前后2个冬小麦品种施钼处理叶片半致死温度(LT50)均显著低于缺钼处理，低温胁迫后，2个冬小麦品种缺钼处理电解质渗透率和丙二醛（MDA）含量均显著高于施钼处理。在低温胁迫进程中，钼低效品种缺钼处理半致死温度(LT50)、电解质渗透率、丙二醛（MDA）含量的上升幅度高于钼高效品种，说明低温胁迫下冬小麦钼低效品种对缺钼更敏感。2．采用营养液培养的方法，研究了在低温胁迫下施钼对冬小麦根及叶片含钼酶活性的影响。低温胁迫前后施钼均显著提高2个冬小麦品种根及叶片中NRAmax、NRAact活性和NRA活化状态；低温胁迫前后施钼显著提高了2个冬小麦品种根及叶片中AO和XDH活性，低温胁迫时间越长，缺钼处理AO和XDH活性下降幅度越大。低温胁迫下冬小麦含钼酶活性存在基因型差异，钼低效品种施钼处理含钼酶活性上升幅度更大。3．采用营养液培养的方法，研究了在低温胁迫下施钼对冬小麦根及叶片内源激素的影响。结果表明，低温胁迫前后施钼均显著提高2个冬小麦品种根及叶片中ABA和IAA含量，低温胁迫前期缺钼与施钼处理根及叶片中GA3和Z含量差异不显著，低温胁迫后期施钼显著降低了冬小麦根及叶片中GA3含量，显著提高了冬小麦根及叶片中Z含量。低温胁迫下缺钼冬小麦根及叶片ABA／GA比值显著下降破坏了的冬小麦激素稳态平衡。钼低效品种施钼处理叶片及根中ABA、IAA、Z含量和ABA／GA比值的上升幅度，GA3含量下降幅度均远高于钼高效品种，说明缺钼对冬小麦内源激素及其稳态平衡的影响存在基因型差异。4．研究了在低温胁迫下施钼对冬小麦叶片抗氧化酶活性影响。结果表明，低温处理2、4和6d时施钼均显著提高了超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性，显著降低了2个冬小麦品种叶片中超氧阴离子产生速率；施钼后，随着低温胁迫时间的延长，2个冬小麦品种叶片中4种抗氧化酶活性均先升高而后呈下降或突降趋势，说明施钼冬小麦能通过正常的低温锻炼，有利于植株在经受更长时间低温胁迫时维持较高的抗寒力；钼对冬小麦钼高、低效品种叶片中抗氧化酶活性的影响存在基因型差异，与钼高效品种相比，钼低效品种缺钼处理叶片SOD、CAT、POD和APX等抗氧化酶活性下降幅度更大，活性氧自由基积累速率更大。5．低温胁迫下钼对冬小麦光合作用气体交换参数的影响。结果表明，低温胁迫下施钼显著提高2个品系叶片的净光合速率（Pn）和气孔限制值（Ls），显著降低叶片气孔导度（Gs）、胞间CO2浓度（Ci）和蒸腾速率（Tr）。随着低温处理时间的延长Pn下降，施钼处理Ci降低、Ls升高，说明其Pn下降主要由气孔限制因素引起；不施钼处理低温胁迫前期（0-4d）Ci下降、Ls升高，而后期（4-6d）Ci升高、Ls下降，说明不施钼处理Pn下降在低温胁迫前期可能主要由气孔限制因素引起，而低温胁迫后期可能主要由非气孔因素引起。钼对冬小麦叶片光合参数的影响存在基因型差异，低温处理前后钼低效品系施钼处理叶片Pn上升幅度和Tr下降幅度均显著高于钼高效品系。6．研究了低温胁迫下施钼对冬小麦钼高效品系97003和钼低效品系97014叶片光合作用光响应曲线和CO2响应曲线参数的影响。结果表明，低温胁迫下施施钼显著提高了2个冬小麦品种叶片最大净光合速率(Amax)、光饱和点（LSP），表观量子效率（AQY）、CO2饱和点（CSP）、表观羧化效率（CE）、Rubisco最大羧化效率(Vcmax)和最大电子传递速率(Jmax)，显著降低冬小麦叶片光补偿点（LCP）、光下呼吸速率(Rday)和CO2补偿点（CCP），这可能是施钼提高冬小麦叶片净光合速率的原因。7．研究了低温胁迫下施钼对冬小麦叶片光合色素、细胞色素和内囊体膜蛋白质复合体含量的影响。结果表明，低温胁迫下冬小麦叶片施钼提高了冬小麦叶片叶绿素总量、叶绿素a和叶绿素b含量，缺钼导致chla／b比值逐渐升高，说明低温胁迫下缺钼冬小麦叶绿素a向叶绿素b转化受阻；施钼显著提高冬小麦叶片的类胡萝卜素含量，从而降低光抑制，有利于活性氧自由基的清除。低温胁迫前后施钼均显著提高了冬小麦叶片中的细胞色素f、细胞色素b563、光系统Ⅰ和细胞色素b6／f复合体含量，低温胁迫后期施钼显著提高了冬小麦叶片中细胞色素b559和光系统Ⅱ的含量，提高对光能的吸收和电子传递能力。低温胁迫下PSI复合体和细胞色素b6／f复合体对缺钼的反应更为敏感，推测低温下缺钼首先导致光系统Ⅰ和细胞色素b6／f复合体的损伤，进而才导致光系统Ⅱ的损伤。8．研究了在低温胁迫下施钼对冬小麦叶片ABA含量、ABA依赖型抗寒基因、CBF／DREB转录因子基因和ABA非依赖型抗寒基因表达的影响。结果表明：随着低温胁迫的延长，2个冬小麦品种叶片ABA依赖型抗寒基因、CBF／DREB转录因子基因、ABA非依赖型基因的mRNA表达量均呈先快速上升后下降的趋势。低温胁迫前后2个冬小麦品种施钼处理ABA含量均显著增加，低温胁迫3h时施钼处理ABA依赖型抗寒基因（Wrab15、Wrab17、Wrab18和Wrabl9）mRNA表达量开始显著增加，推测钼可以通过醛氧化酶（AO）→ABA→bZIP→ABRE→COR基因表达这一途径来调控冬小麦的抗寒力。低温胁迫前缺钼与施钼处理CBF／DREB转录因子基因（TaCBF和Wcbf2-1）和ABA非依赖型基因（WCS120、WCS19、Wcor14和Wcor15）表达量差异均不显著，低温处理3h时，施钼冬小麦CBF／DREB转录因子基因（TaCBF和Wcbf2-1）表达量丌始显著增加，低温处理6h时，施钼处理ABA非依赖型基因（WCS120、WCS19、Wcor14和Wcor15）表达量开始显著增加，推测钼还能通过低温信号→CBF／DREB转录因子→CRT／DRE元件→COR基因表达这一途径来调控冬小麦的抗寒力的形成。9．通过双向电泳和质谱技术相结合的方法，研究了低温胁迫下钼对冬小麦叶片蛋白质表达的影响，并应用荧光定量PCR技术对编码差异蛋白质点的基因的mRNA表达量进行了动态分析。结果表明，低温胁迫前，施钼后叶片中的产生特异蛋白质点有2个；缺钼与施钼处理中表达量差异达1.5倍以上的蛋白质点15个；低温胁迫后，施钼处理叶片中的产生特异蛋白质点有3个，缺钼与施钼处理中表达量差异达1.5倍以上的蛋白质点13个。对12个蛋白质点的质谱鉴定结果表明，有5个蛋白质点（spot814、spot1296、spot1297、spot1255和spot1157）的功能与光合作用光反应过程有关，4个蛋白质点（spot918、spot548、spot1386和spot648）的功能与光合作用暗反应过程有关，1个蛋白质点（spot991）的功能与叶绿体基因的转录过程有关，1个蛋白质点（spot1305）功能与蛋白质翻译过程有关，1个蛋白质点（spot1058）在数据库中未找到匹配结果，这说明说明钼营养通过蛋白质表达调控冬小麦光合作用、叶绿体基因转录及蛋白质翻译等生理生化过程，但钼对光合作用的影响更为突出。10．结合含钼酶、激素、抗氧化系统、光合特性及内囊体膜组成的分析结果，提出了钼提高冬小麦抗寒力和增强光合作用的生理及分子机制。该机制以含钼酶活性的变化为基础，以植物钼营养对基因表达与蛋白质翻译的调控为核心，明确了叶绿体是缺钼条件下各种生化反应与代谢过程发生改变的关键部位，低温胁迫是各种基因表达及生理过程发生剧烈变化的诱发因素。

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略词表（ABBREVIATION）
  • 1 文献综述
  • 1.1 植物钼营养研究进展
  • 1.1.1 高等植物中的钼酶与钼辅因子
  • 1.1.2 植物体内钼的吸收运输与分布规律
  • 1.1.3 植物钼营养对碳、氮及其他元素代谢与平衡的影响
  • 1.1.4 植物钼营养与激素合成及植物抗性的关系
  • 1.1.5 植物钼营养的基因型差异
  • 1.2 植物抗寒机理研究进展
  • 1.2.1 植物抗寒的生理基础
  • 1.2.2 植物膜系统与抗寒性的关系
  • 1.2.3 植物激素及信号传导与植物抗寒性的关系
  • 1.2.4 植物抗寒的分子机理
  • 1.3 荧光定量PCR技术及其在植物分子生物学研究中的应用
  • 1.3.1 荧光定量PCR技术及特点
  • 1.3.2 常用的荧光标记方法
  • 1.3.3 荧光定量PCR的定量方法
  • 1.3.4 实时荧光定量PCR技术的在植物分子生物学研究中的应用
  • 1.4 双向电泳和质谱技术在植物蛋白质组学研究中的应用
  • 1.4.1 蛋白质组学概念
  • 1.4.2 双向凝胶电脉和质谱技术是蛋白质组学研究的主要方法
  • 1.4.3 双向电泳和质谱技术在植物蛋白质组学研究中的应用
  • 1.5 问题与展望
  • 2 研究背景、目标、内容及技术路线
  • 2.1 研究背景
  • 2.2 研究目标
  • 2.3 研究内容
  • 2.4 技术路线
  • 3 低温胁迫下钼对冬小麦半致死温度及膜脂过氧化的影响
  • 3.1 引言
  • 3.2 材料与方法
  • 3.2.1 试验材料
  • 3.2.2 试验设计及取样
  • 3.2.3 测定方法
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 低温胁迫下钼对冬小麦叶片钼含量的影响
  • 50)的影响'>3.3.2 低温胁迫下钼对冬小麦叶片半致死温度(LT50)的影响
  • 3.3.3 低温胁迫下钼对冬小麦叶片中电解质渗透率的影响
  • 3.3.4 低温胁迫下钼对冬小麦叶片丙二醛（MDA）含量的影响
  • 3.4 讨论
  • 3.4.1 低温胁迫下钼对冬小麦抗寒力的影响
  • 3.4.2 低温胁迫下钼对冬小麦细胞膜伤害程度的影响
  • 3.4.3 抗寒性指标对缺钼反应的基因型差异
  • 3.5 结论
  • 4 低温胁迫下钼对冬小麦含钼酶活性的影响
  • 4.1 引言
  • 4.2 材料与方法
  • 4.2.1 试验材料
  • 4.2.2 营养液培养试验及取样
  • 4.2.3 测定方法
  • 4.3 结果与分析
  • 4.3.1 低温胁迫下钼对冬小麦根及叶片中钼含量的影响
  • 4.3.2 低温胁迫下钼对冬小麦根及叶片中硝酸还原酶的影响
  • 4.3.3 低温胁迫下钼对冬小麦根及叶片中醛氧化酶活性的影响
  • 4.3.4 低温胁迫下钼对冬小麦根及叶片中黄嘌呤脱氢酶活性的影响
  • 4.4 讨论
  • 4.4.1 低温胁迫下钼对硝酸还原酶调控及其影响
  • 4.4.2 低温胁迫下钼通过醛氧化酶调控激素合成
  • 4.4.3 低温胁迫钼通过黄嘌呤脱氢酶调控激素稳态平衡及活性氧代谢
  • 4.4.4 低温胁迫下冬小麦根与叶片中含钼酶活性的差异
  • 4.4.5 低温胁迫下冬小麦含钼酶活性的基因型差异
  • 4.5 结论
  • 5 低温胁迫下钼对冬小麦内源激素的影响
  • 5.1 引言
  • 5.2 材料与方法
  • 5.2.1 试验材料
  • 5.2.2 营养液培养试验及取样
  • 5.2.3 测定方法
  • 5.3 结果与分析
  • 5.3.1 低温胁迫下钼对冬小麦根中内源激素含量的影响
  • 5.3.2 低温胁迫下钼对冬小麦叶片内源激素含量的影响
  • 5.3.3 低温胁迫下钼对冬小麦ABA/GA比值的影响
  • 5.4 讨论
  • 5.4.1 内源激素含量的变化奠定了通过信号传导调控冬小麦抗寒力的物质基础
  • 5.4.2 缺钼冬小麦ABA/GA比值显著下降破坏了的冬小麦激素稳态平衡
  • 5.4.3 ABA和IAA合成受阻是造成缺钼植株激素破坏的主要原因
  • 5.4.4 缺钼对冬小麦内源激素及其平衡的影响存在基因型差异
  • 5.5 结论
  • 6 低温胁迫下钼对冬小麦抗氧化酶活性的影响
  • 6.1 引言
  • 6.2 材料与方法
  • 6.2.1 试验材料
  • 6.2.2 试验设计及取样
  • 6.2.3 测定方法
  • 6.3 结果与分析
  • 6.3.1 低温胁迫下施钼对不同钼效率品种冬小麦叶片钼含量的影响
  • 6.3.2 低温胁迫下钼对冬小麦超氧阴离子产生速率的影响
  • 6.3.3 低温胁迫下钼对冬小麦超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响
  • 6.3.4 低温胁迫下钼对冬小麦过氧化氢酶（CAT）活性的影响
  • 6.3.5 低温胁迫下钼对冬小麦过氧化物酶（POD）活性的影响
  • 6.3.6 低温胁迫下钼对冬小麦抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的影响
  • 6.4 讨论
  • 6.4.1 低温胁迫下施钼有利于冬小麦的抗氧化酶活维持在较高水平
  • 6.4.2 钼对冬小麦抗氧化酶活性的影响存在基因型差异
  • 6.5 结论
  • 7 低温胁迫下钼对冬小麦光合特性及内囊体膜组成的影响
  • 7.1 低温胁迫下钼对冬小麦光合作用气体交换参数的影响
  • 7.1.1 前言
  • 7.1.2 材料与方法
  • 7.1.3 结果分析
  • 7.1.4 讨论
  • 7.1.5 结论
  • 2响应曲线的影响'>7.2 低温胁迫下钼对冬小麦叶片光合作用光响应曲线和CO2响应曲线的影响
  • 7.2.1 前言
  • 7.2.2 材料与方法
  • 7.2.3 结果与分析
  • 7.2.4 讨论
  • 7.2.5 结论
  • 7.3 低温胁迫下钼对冬小麦叶片内囊体膜组成的影响
  • 7.3.1 前言
  • 7.3.2 材料与方法
  • 7.3.3 结果与分析
  • 7.3.4 讨论
  • 7.3.5 结论
  • 8 低温胁迫下钼对冬小麦抗寒基因表达的影响
  • 8.1 引言
  • 8.2 材料与方法
  • 8.2.1 试验材料
  • 8.2.2 试验设计及取样
  • 8.2.3 荧光定量PCR分析
  • 8.2.4 ABA含量的测定
  • 8.2.5 数据分析
  • 8.3 结果与分析
  • 8.3.1 低温胁迫下钼对冬小麦叶片ABA含量的影响
  • 8.3.2 低温胁迫下钼对冬小麦ABA依赖型（ABA-dependence）抗寒基因表达的影响
  • 8.3.3 低温胁迫下钼对冬小麦CBF/DREB转录因子基因表达的影响
  • 8.3.4 低温胁迫下钼对冬小麦ABA非依赖型（ABA-independence）抗寒基因的影响
  • 8.4 讨论
  • 8.4.1 低温胁迫下钼对冬小麦ABA依赖型抗寒基因表达的调控及影响
  • 8.4.2 低温胁迫下钼对冬小麦ABA非依赖型抗寒基因表达的调控
  • 8.4.3 ABA依赖型和ABA非依赖型抗寒基因表达途径对缺钼反应的时序性分析
  • 8.4.4 冬小麦钼高、低效品种抗寒基因表达的差异分析
  • 8.5 结论
  • 9 低温胁迫下钼对冬小麦蛋白质表达的影响
  • 9.1 前言
  • 9.2 材料与方法
  • 9.2.1 供试材料与试验设计
  • 9.2.2 双向电泳与质谱鉴定
  • 9.2.3 荧光定量PCR分析
  • 9.3 结果分析
  • 9.3.1 低温胁迫前钼对冬小麦叶片可溶性蛋白质表达的影响
  • 9.3.2 低温胁迫后钼对冬小麦叶片可溶性蛋白质表达的影响
  • 9.3.3 低温胁迫下钼对冬小麦光反应相关基因mRNA表达水平的影响
  • 9.3.4 低温胁迫下钼对冬小麦暗反应相关基因mRNA表达水平的影响
  • 9.3.5 低温胁迫下钼对冬小麦rpp1和cp31BHv基因mRNA转录水平的影响
  • 9.4 讨论
  • 9.4.1 质谱鉴定及数据库检索结果的可信性分析
  • 9.4.2 钼对冬小麦光合作用相关蛋白表达的影响
  • 9.4.3 钼对冬小麦基因转录和蛋白质翻译相关蛋白表达的影响
  • 9.4.4 低温胁迫下钼对冬小麦质谱鉴定的差异蛋白质点对应基因mRNA表达量的影响
  • 9.5 结论
  • 10 讨论与总结
  • 10.1 讨论
  • 10.1.1 钼提高冬小麦抗寒力和增强光合作用的可能机制
  • 10.1.2 亟待深入研究的问题
  • 10.2 本论文的创新之处
  • 10.3 主要结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录Ⅰ-1 柱式总RNA抽提方法
  • 附录Ⅰ-2 第一链CDNA合成程序
  • 附录Ⅲ 热启动荧光定量PCR核心试剂盒说明书
  • 附录Ⅳ 质谱鉴定蛋白质点数据库检索结果
  • 附录Ⅴ 已经发表或待发表的论文

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