子宫颈病变中人乳头瘤病毒基因类型的分布和L2蛋白的定位

论文摘要

目的:研究子宫颈病变中人乳头瘤病毒（HPV）基因类型的分布和HPV L2蛋白的定位及检测意义。材料和方法:收集延边大学医院、延边妇幼保健院、延边肿瘤医院病理科1996-2006年存档蜡块标本,其中包括宫颈鳞癌72例、宫颈腺癌28例和宫颈上皮内瘤变（CIN-1,CIN-2和CIN-3）196例。应用寡核苷酸基因芯片技术检测组织中的HPV基因类型,并采用免疫组织化学染色方法应用RG-1抗体检测HPVL2蛋白表达的检测意义。同时,应用基因转染的方法将HPV L2 DNA转染到HeLa宫颈癌细胞中,应用免疫荧光技术和共聚焦显微镜观察转染后L2蛋白的定位。结果:在全部20例正常宫颈鳞状上皮中HPV均为阴性表达。高危型HPV在CIN-1,CIN-2,CIN-3,宫颈鳞癌以及宫颈腺癌中的阳性率分别为33.9%,51.6%,57.7%,91.7%和78.6%。在CIN及宫颈鳞癌的病变中HPV16是主要的感染类型,而在宫颈腺癌中HPV的感染类型以18型为主,其次为16型。仅有部分CIN-3,宫颈鳞癌及宫颈腺癌的病例表现为混合型的HPV感染,但是在CIN-1/2中未发现混合型HPV感染的病例。另外,应用RG-1单克隆抗体通过免疫组化检测HPVL2蛋白表达的结果表明,全部20例宫颈正常上皮均为阴性,而且在CIN-3,宫颈鳞癌及宫颈腺癌的标本中也未检测到L2蛋白阳性的病例。但在HPV16感染阳性的CIN-1/2的病变部位可见明显的胞核阳性细胞,而且这些阳性细胞位于病变鳞状上皮末端分化的部位。应用免疫荧光技术和共聚焦显微镜观察HPV L2DNA质粒转染过的HeLa细胞,发现HPV L2蛋白与PML存在于细胞核中,而且呈颗粒样弥散分布。结论:HPV16型是宫颈鳞状细胞癌中最常见的感染类型,检测HPV16可能有助于预测CIN2/3的发生发展趋势;但在宫颈腺癌中,HPV18和16型的感染率都很高。HPV L2蛋白仅在鳞状上皮末端分化的细胞中有阳性表达,而在宫颈鳞癌和腺癌中,虽然存在HPV的感染,但由于分化较差,L2蛋白即为阴性。HPVL2蛋白与PML共存于L2 DNA转染的HeLa细胞核中,呈颗粒状弥散分布,与免疫组化L2蛋白的阳性表达部位一致。而且,HPV L2单克隆抗体RG-1的免疫组化检测有助于早期发现CIN1/2病变中HPV16和18型的感染。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• Sheet for Abbreviation（缩略语表）
• 1.Introduction（引言）
• 2.Materials and Methods（材料和方法）
• 2.1 Cervical Tissue Specimen（组织标本）
• 2.2 Immunohistochemistry（免疫组化染色）
• 2.3 Gene transfection（基因转染）
• 2.4 Immunofluoresence（免疫荧光染色）
• 2.5 DNA extraction（DNA提取）
• 2.6 HPV-DNA chip（基因芯片技术）
• 2.7 Interpretation（判定标准）
• 2.8 Statistical analysis（统计分析）
• 3.Results（结果）
• 4.Tables（表格）
• 5.Figures（图）
• 6.Discussion（讨论）
• 7.Conclusions（结论）
• 8.References（参考文献）
• 9.Acknowledgements（致谢）
• 10.Reviews（综述）
• 11.References（参考文献）
• 12.Appendix（附录-研究生期间发表的论文）