人类疱疹病毒6型7型潜伏与复发性阿弗他溃疡发生的相关性研究

论文摘要

背景与目的:复发性阿弗他溃疡（recurrent aphthous ulcer, RAU）是最常见的口腔黏膜疾病,患病率高达20%左右,具有反复发作和缓慢自愈的特点,但病因不明。以往的学者用各种检测病毒的方法包括经典的电镜下观察病毒颗粒、病毒培养、免疫血清学研究和现代的分子生物学技术如PCR等,分别以RAU患者病损组织、脱落上皮、唾液、外周血其中的一种或几种作为研究对象,检测病毒颗粒、DNA片段或血清特异性抗体,他们研究过的病毒包括腺病毒、人类乳头瘤病毒及人类疱疹病毒1至8型[1-10],但是大多数没有阳性结果,或患病组与对照组相比没有统计学差异,或有的病毒在人体分布极其广泛因而在病变部位的检出也不具临床意义,亦或在实验方法上不统一、不完善,各结果之间不具可比性甚至互相矛盾。最近实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR;FQ-PCR）技术[11]在各个领域的应用越来越多,具有许多常规PCR不可比拟的优点。它在常规PCR的基础上又增加了TaqMan探针和荧光信号,增加了目的片段扩增的特异性和敏感性。实时定量PCR技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。本实验采用实时荧光定量PCR技术,同时检测临床唾液、脱落上皮细胞（病损区和非病损区）、外周血（白细胞和血浆）样本中人类疱疹病毒6和7型的DNA,进而探索人类疱疹病毒6型7型潜伏与复发性阿弗他溃疡发生的相关性。方法:2007年4月至2007年9月,在大连医科大学附属一院的口腔科以及大医整形美容口腔门诊,经临床诊断确定的轻型RAU患者20例,进行临床采样,样本包括唾液,健康黏膜处脱落上皮细胞,病变处脱落细胞,外周血（白细胞和血浆）。同时期选择接近处理组年龄、性别及社会生活背景分布特征的健康对照组20例健康对照,取口腔黏膜脱落上皮细胞、唾液和外周血（白细胞和血浆）,大连医科大学生物化学教研室核酸组进行样本保存和DNA提取。同期于美国ABI生物公司购买HHV-6及HHV-7（ 08-765-000）标准毒株;根据病毒基因文库调出的HHV-6、7基因序列,设计并合成引物、荧光标记探针。先用特异性引物筛选HHV-6、7,其PCR片段克隆入载体,再对重组质粒进行筛选、测序及鉴定。确证后的DNA片段制成标准品并作为阳性模板,开发FQ-PCR检测系统。用该系统测定研究样品。最后180例提取出的总DNA本送宝生物公司进行病毒实时荧光定量PCR检测。结果:1.本次实验180个标本只有一名患者病损处脱落细胞有HHV-7检出,其余病毒均检出于唾液标本,两组中病毒的检出率分别为,20例轻型RAU患者组HHV-6检出为20%（4/20）,HHV-7检出为35%（7/20）;20个对照组HHV-6检出10%（2/20）,HHV-7检出15%（3/20）。2.卡方检验对HHV-6、HHV-7阳性例数分别进行了对照组和病例组的组间比较,结果P>0.05,无显著性差异。对病例组两种病毒感染率做病毒组间比较,结果尚不能认为两种病毒对RAU患者感染率不同。3.采用两组独立样本的非参数检验方法,对病例组4例和对照组2例HHV-6阳性检出病毒的拷贝数进行统计检验,结果P<0.05,说明组间HHV-6病毒拷贝数有显著差别,结果认为HHV-6病毒在组织细胞内增殖与RAU溃疡的发生可能有相关性。结论:1. HHV-6、HHV-7随机广泛潜伏于人群中,其DNA阳性检出对于RAU患者或健康个体不具诊断意义。2. HHV-6、HHV-7病毒在机体组织细胞内复制增殖与RAU溃疡发生可能存在相关性。3.唾液为HHV-6、7重要的传播媒介,从唾液中取样,以实时定量PCR检测病毒DNA,简便、无创,可作为初步筛选的方法。4.若在病毒大量复制后溃疡早期结合血清特异性抗体检测,会更具说服力,可以为RAU的抗病毒治疗提供实验依据。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、主要英文缩略语