论文摘要
临床上硫唑嘌呤（AZA）常用于急性白血病、器官移植和一些自身免疫疾病的治疗。由于该药可产生严重的甚至可危及生命的血液毒性、肝脏损害和胃肠紊乱等不良反应,导致治疗的被迫中断甚至治疗失败,故其合理使用在临床上倍受关注。研究发现,硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）和三磷酸肌苷焦磷酸酶（ITPA）都与AZA的代谢有关,由于控制TPMT和ITPA的基因具有遗传多态性,使AZA在人群中的代谢呈现明显的多态性,进而使不同个体药物的作用强度和毒性亦不同。因此,在器官移植患者中,研究TPMT和ITPA基因多态性与AZA所致不良反应的关系,有助于实现AZA用药个体化,避免产生严重的不良反应。本研究征选155例服用或曾经服用过AZA的肾移植受者做为研究对象,建立了新的高效液相色谱法（HPLC）荧光检测其红细胞TPMT活性,确定TPMT活性分布。采用等位基因特异性的PCR和限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）的方法,检测了TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的基因突变频率。此外,本研究以健康受试者为研究对象,考察了环孢素、氢化可的松和硝苯地平等肾移植受者常用药物对TPMT活性的影响。另一方面,本研究建立了新的HPLC法检测这155例肾移植受者红细胞ITPA活性,确定ITPA活性分布。采用实时荧光定量PCR和PCR-RFLP法检测了ITPA 94C>A和IVS2+21A>C的基因突变频率。在此基础上,结合这155例肾移植受者发生不良反应的情况,系统地分析了TPMT和ITPA活性和基因多态性与AZA所致不良反应的关系。本研究结果显示,155例患者TPMT活性范围为13.0468.25U,平均活性为（36.00±12.32）U,呈正态分布。30例患者（19.4%）显示TPMT中等活性,未发现TPMT低活性或该酶活性缺乏者。共发现7例TPMT*3C突变基因杂合子个体,其突变频率为2.26%,7例患者均表现为中等TPMT活性,说明TPMT*3C基因突变可导致TPMT活性的降低。在体外,环孢素、氢化可的松、卡托普利以及别嘌呤醇,对TPMT活性抑制作用较弱。硝苯地平能明显抑制TPMT的活性,中等活性组的平均IC50值为（24.37±16.64）μg·mL-1,正常活性组的平均IC50值为（11.81±10.03）μg·mL-1。155例肾移植受者ITPA活性范围为0191.2U,平均为（96.1±37.1）U,呈双峰分布。3例ITPA活性为0U的患者为ITPA活性缺乏者,其ITPA基因型为94C>A突变基因纯合子。另外发现31例ITPA 94C>A突变基因杂合子个体均为ITPA低活性患者（<70U）。ITPA 94C>A突变频率为11.9%,本研究未发现ITPA IVS2+21A>C突变基因。ITPA 94C>A基因突变是导致ITPA活性降低的主要因素。155例肾移植受者中,120例患者未发生不良反应,将其作为对照组,平均TPMT活性为（37.26±11.60）U,平均ITPA活性为（97.9±34.7）U。另外35例患者由于发生了不良反应而停用AZA或减少了AZA的剂量。其中12例患者产生了血液毒性,平均TPMT活性为（22.92±10.67）U,明显低于对照组（t检验,P<0.05）,其中仅2例患者为TPMT*3C突变基因杂合子,AZA所致的血液毒性主要与患者红细胞TPMT活性低下有关。18例患者产生了肝脏毒性,其TPMT和ITPA活性离散度较大,其均值分别与对照组比较均无统计学差异（t检验,P>0.05）。其中仅发现2例TPMT*3C和4例ITPA 94C>A突变基因杂合子,TPMT和ITPA活性和基因多态性与AZA所致的肝脏毒性无明显相关性。5例患者产生了胃肠紊乱症状（包括1例患者同时产生了肝脏毒性）,其中有2例患者ITPA活性缺乏,为ITPA 94C>A突变基因纯合子,另外3例患者ITPA活性较低,为ITPA 94C>A突变基因杂合子。剩余1例患者出现了流感样症状,ITPA活性缺乏,为ITPA 94C>A突变基因纯合子。ITPA活性缺乏或ITPA 94C>A基因突变纯合子患者极易发生AZA所致胃肠紊乱症状和流感样症状的不良反应。因此,在服用AZA之前,对患者TPMT活性进行测定,有利于避免AZA所致血液毒性的发生。而对患者进行ITPA活性和基因多态性检测,有利于避免AZA所致的胃肠紊乱和流感样症状的产生,使AZA的使用更加安全、合理。
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标签：硫唑嘌呤论文; 硫嘌呤甲基转移酶论文; 三磷酸肌苷焦磷酸酶论文; 药物不良反应论文;