论文摘要
目的:肝纤维化发病率高,预后差。中医药治疗肝纤维化已经积累了丰富的经验。参考王旭高治肝大法和秦伯未《谦斋医学讲稿》中的用药经验,我们组成了方剂甲乙煎。该方临床应用中取得了满意的疗效。本实验的目的在于观察中药甲乙煎对实验性肝纤维化大鼠MMP-2（基质金属蛋白酶-2）及TGF-β1（转化生长因子β1）的影响,以探讨其对肝纤维化的治疗作用和分子机制。方法:雄性清洁级Wister大鼠60只,体重为200±20克。随机分为正常对照组和造模组,对造模组大鼠给予DMN（二甲基亚硝胺）10mg·kg -1·d -1腹腔注射,每周三次,首次用量减半,连续四周,造模期间大鼠按清洁级标准饲养,造模结束后随机抽取一只做肝脏病理切片,证实有假小叶形成,为肝纤维化Ⅳ级。造模结束后将造模组大鼠随机分为模型组对照组、甲乙煎高浓度组和低浓度组。对甲乙煎高浓度组和低浓度组每天分别给予22g/kg、5.5 g/kg中药甲乙煎灌胃治疗,共治疗四周,模型对照组和正常对照组给予等容量的生理盐水灌胃,每天一次,共四周。末次给药后次日空腹处死全部大鼠。对肝组织进行HE和Masson染色观察,并采用免疫组化法检测大鼠肝组织MMP-2和TGF-β1的表达。结果1大鼠一般情况比较正常对照组大鼠生长状态良好,体重增加,动作敏捷,皮毛光滑,二便正常,模型组大鼠精神萎靡,嗜睡,皮毛杂乱无光泽,尿黄,大便稀,有异味,治疗组大鼠生长状态尚好,体重无明显下降,动作灵活,皮毛较顺但缺光泽,二便尚可。2大鼠肝组织肉眼观察正常对照组大鼠肝脏外观红润,表面光滑,质地柔软;肝纤维化模型组大鼠肝脏外观偏小,呈黄褐色,表面粗糙,部分见细小结节,质地较脆;各治疗组大鼠肝脏外观呈褐色,表面粗糙,部分偶见细小结节,质地偏硬。3大鼠肝组织显微镜观察正常对照组大鼠肝组织HE染色,肝小叶结构正常,肝细胞索以肝小叶中央静脉为中心呈放射壮排列,肝细胞呈多层单核壮排列;模型组大鼠肝组织HE染色形成了假小叶,肝细胞索排列紊乱,肝内纤维化间隔增多增宽,自汇管区和中央静脉向周围延伸,小叶内中央静脉偏离或消失,肝细胞肿胀或坏死,偶有不典型增生;甲乙煎高浓度组大鼠的肝小叶未被完全分割,肝细胞索排列尚规则,周围增生纤维较稀薄,肝细胞变性坏死较少,有再生肝细胞,汇管区偶有炎症细胞;甲乙煎低浓度组的大鼠有不完整的假小叶,肝细胞索排列稍紊乱,汇管区纤维组织增生,少量炎症细胞。Masson染色（纤维染绿）示:正常对照组大鼠肝组织无胶原纤维增生;模型组大鼠肝组织汇管区大量胶原纤维和网状纤维增生,形成纤维间隔包裹假小叶;甲乙煎高浓度组大鼠在汇管区与肝窦见少量绿色胶原纤维;甲乙煎低浓度组大鼠在汇管区与肝窦有较多绿色胶原纤维,相对模型组较少。4大鼠肝组织炎症活动度及肝纤维化程度计分结果与正常对照组比较,肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度计分及肝纤维化程度计分均明显升高,差异有非常显著性意义（P<0.01）;用甲乙煎高、低浓度组治疗后,大鼠肝组织炎症活动度计分及肝纤维化程度计分均明显降低,尤其是中药甲乙煎高浓度组大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度评分降低最明显,与肝纤维化模型组比较,差异有显著性意义（P﹤0.05）。5免疫组化法检测大鼠肝细胞MMP-2和TGF-β1的蛋白表达:（1）与正常对照组比较,肝纤维化模型组大鼠肝组织MMP-2的表达升高,差异有非常显著意义（P﹤0.01）;与肝纤维化模型组比较,甲乙煎高、低浓度组大鼠肝组织内MMP-2的表达差异无显著意义（P>0.05）;（2）与正常对照组比较,肝纤维化模型组大鼠肝组织TGF-β1表达明显升高,差异有非常显著意义（P﹤0.01）;与肝纤维化模型组比较,甲乙煎高、低浓度组大鼠肝组织TGF-β1的表达较明显降低,差异有显著性意义（P﹤0.05）;甲乙煎高浓度组较低浓度组TGF-β1的表达亦明显降低,差异有显著性意义（P﹤0.05）。结论:（1）甲乙煎有明显减轻试验性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度及肝纤维化程度的作用,（2）肝纤维化大鼠肝组织MMP-2和TGF-β1的表达增强,表明MMP-2和TGF-β1可能是影响肝纤维化形成的重要因素,（3）甲乙煎能下调实验性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1的表达,这是其抗肝纤维化的作用机理之一。