HPVE6/E7蛋白相关功能性基因多态与宫颈癌易感性的关联研究

论文摘要

宫颈癌的发病率占全球恶性肿瘤第七位,但是占全球女性恶性肿瘤的第二位,仅次于乳腺癌,是严重威胁全球女性健康和生命的疾病之一。2002年全球估计有新发病例493000例,其中83%发生于发展中国家,全球每年约有274000女性死于宫颈癌。我国也是宫颈癌的高发地区,每年大约有10万左右宫颈癌新发病例,占世界每年新发病例1/5。宫颈癌给中国卫生资源的投入和分配带来沉重负担。如何识别宫颈癌的高危人群,进一步降低宫颈癌的发病率,是摆在我们面前的一个难题。目前认为,宫颈癌的形成是一个多因素、多阶段的过程,是由于环境危险因素和个体遗传因素交互作用的结果。尽管很多人接触相同的环境危险因素,但仅有少数人最终发生宫颈癌,说明不同个体对环境暴露的反应存在易感性。大量研究证实,宫颈癌的发生与高危型HPV（Human Papillomavirus）持续性感染密切相关,而HPV的E6、E7蛋白是宫颈癌发生中最重要的调控蛋白。MicroRNAs（miRNAs）是一类大小约21-24核苷酸的非编码RNA,它通过与靶mRNA 3’-非翻译区域（UTR）区的碱基配对来调控基因的表达,可以导致靶mRNA的降解或者翻译的抑制,参与包括发育、代谢、细胞增长、凋亡、干细胞分化等几乎全部病理生理学过程。miRNAs的表达谱可以区分瘤组织和非瘤组织,并且具有肿瘤特异性。最近研究表明,HPV E6、E7蛋白相关的基因以及非编码RNA在宫颈癌组织中表达异常,因此这些基因或者非编码RNA的遗传变异可能引起蛋白表达的改变,进而影响到宫颈癌的发生发展进程。SNP（single nucleotide polymorphism,单核苷酸多态性）,是指变异频率大于1 %的单核苷酸变异。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。基于SNP的本质,我们假设是:HPV E6、E7蛋白相关的基因以及非编码RNA上的功能性多态与宫颈癌的易感性有关。因此,本研究采用以医院为基础的病例对照研究方法,对与HPV E6、E7蛋白相关的基因TP53、BRCA1（breast cancer susceptbility gene1）、BARD1（BRCA1 associated ring domain 1）以及非编码RNA的功能性SNPs单独或者联合与宫颈癌遗传易感性的关系进行探讨,结果对于进一步阐明宫颈癌发病机制和发现与我国人群宫颈癌遗传易感性相关的危险基因型,并将其作为分子标志物用于筛选高危人群或者易感个体,以及对实施目标明确的个体预防等均具有重要的理论和实践意义。第一部分HPV E6/E7蛋白相关功能基因编码区单核苷酸多态性与宫颈癌易感性的关联研究[目的]以往的研究表明与HPV E6、E7蛋白相关的基因TP53、BRCA1、BARD1在宫颈癌的发生发展过程中起重要作用。本研究的目的是探讨这些基因上潜在的功能性SNP改变与宫颈癌遗传易感性的关系。[方法]采用以医院为基础的病例对照研究设计,收集组织学确诊的宫颈癌病例404例和与之年龄、地区频数匹配的对照404例。采用PCR-RFLP（Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,聚合酶连反应-限制性片段长度多态性）和PCR-PIRA（PCR-Primer Introduced Restriction Analysis,引物引入限制性分析）方法对TP53 Pro72Arg （rs1042522）, BRCA1 Pro871Leu （rs799917）, BARD1 Pro24Ser （rs1048108）和Arg378Ser （rs2229571）进行多态性检测,比较不同的基因型与宫颈癌发病风险的关系。[结果] Logistic回归分析显示, BRCA1 Pro871Leu的TT基因型与CT/CC基因型相比,可以显著降低宫颈癌的发病风险（校正OR =0.62, 95% CI = 0.40-0.95）。而另外3个位点多态性改变与宫颈癌的发病风险间并无显著的关联。BARD1 Pro24Ser的TT基因型与CT/CC基因型相比,校正OR=1.01,95%CI=0.68-1.50。BARD1Arg378Ser的CC基因型与GG/GC基因型相比,校正OR=1.04,95%CI=0.64-1.64。TP53 Pro72Arg的CC基因型与GG/GC基因型相比,校正OR=0.84,95%CI=0.59-1.20。对BRCA1 Pro871Leu进行分层分析,发现突变纯合子TT的保护效应在绝经后女性（校正OR值为0.54,95%CI为0.30-0.96）,活产胎次大于等于2的女性（校正OR值为0.49,95%CI为0.27-0.91）,初产年龄小于25岁的女性（校正OR值为0.59,95%CI为0.34-1.00）,BARD1 Pro24Ser TT/CT基因型携带者（校正OR值为0.56,95%CI为0.32-1.00）,BARD1 Arg378SerCC/GC基因型携带者（校正OR值为0.49,95%可信区间为0.28-0.87）,以及TP53 Pro72Arg CC/GC基因型携带者（校正OR值为0.56,95%CI为0.36-1.00）中更加显著。但各层间的异质性检验P值均大于0.05。[结论] BRCA1 Pro871Leu的多态性改变可能与中国人群宫颈癌的遗传易感性有关。第二部分miR-218调控区多态、TP53功能多态与宫颈癌发病风险的关联研究[目的]近年来发现非编码的RNA在肿瘤的发生过程中起重要作用,研究发现miR-218在宫颈癌中低表达。本研究的目的是探讨miR-218前体序列以及上游调控miR-218表达的TP53基因潜在的功能性SNP改变与宫颈癌遗传易感性的关系。[方法]采用以医院为基础的病例对照研究,收集组织学确诊的宫颈癌病例633例和与之年龄、地区频数匹配的对照633例,以PCR-RFLP方法对miR-218前体侧翼区的功能性SNP位点rs11134527和其上游调控基因TP53基因编码区的rs1042522位点进行多态性检测,比较不同的基因型与宫颈癌发病风险的关系。[结果]统计结果显示分析, miR-218 rs11134527的GG基因型与AA基因型相比,可以显著降低宫颈癌的发病风险（校正OR值为0.70,95%可信区间为0.50-0.99）。而未发现TP53 rs1042522位点多态性与宫颈癌的发病风险间存在显著相关性（校正OR值为1.56,95%可信区间为0.84-1.60）。对miR-218 rs11134527（GG vs AA）与宫颈癌发病风险的分层分析发现突变纯合子GG的保护效应在下列人群中更加显著:年龄大于等于55岁的女性（校正OR值为0.59,95%可信区间为0.35-0.99）,一级亲属无肿瘤家族史的女性（校正OR值为0.36,95%可信区间为0.18-0.71）,绝经后的女性（校正OR值为0.55,95%可信区间为0.34-0.86）。但是,除了肿瘤家族史的层间效应有统计学意义（P=0. 03）,其余各层间的异质性检验P值均大于0.05。另外,我们统计分析并没有发现miR-218 rs11134527和TP53 rs1042522间存在显著的交互作用（P值均大于0.05）。[结论] miR-218前体侧翼区的功能性多态改变可能与中国人群宫颈癌的遗传易感性有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 序言
• 第一部分 HPV E6/E7 蛋白相关功能基因编码区单核苷酸多态性与宫颈癌易感性的关联研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 miR-218 调控区多态、TP53 功能多态与宫颈癌发病风险的关联研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录一
• 附录二
• 致谢