论文摘要
目的:1、确认KKay小鼠糖尿病前期高胰岛素（胰岛素抵抗）状态2、探讨胰岛素抵抗与肝脏形成非酒精脂肪肝状态的关系3、研究运动和DPP-4I对非酒精性脂肪肝的作用和影响因素方法:1、预实验：将4周龄KKay适应性喂养一周后，随机分成二组，每组8只，分别为KKay普通饮食组，KKay高脂饮食诱导组，持续4周（即5w-9w），8只C57BL/6j（C57）作为正常对照组。期间对各组小鼠每周测血糖、空腹胰岛素并行OGTT（25%葡萄糖，按2g/kg比例灌胃），通过比较其血糖、糖耐量状况及胰岛素水平，确定糖尿病前期高胰岛素血症状态出现的时期。2、正式实验：在糖尿病前期高胰岛素血症时，将KKay小鼠随机分成四组，分别为KKay普通饮食组（n=10）、KKay高脂饮食组（n=8）、KKay运动（游泳40min/d）干预组（n=16）、KKayDPP-4I（MK-062630mg/kg）干预组（n=16），10只C57BL/6j（C57）作为正常对照组，观察8周，通过比较前后各组指标的变化（血糖、胰岛素、体重、肝重、DAG、PKC-ε、IRS-1tyr），探讨非酒精性脂肪肝与胰岛素抵抗的关系，并研究运动和DPP-4I对非酒精性脂肪肝形成的作用和影响因素。结果:1.预实验：确定7周KKay为糖尿病前期伴高胰岛素血症状态1.1常规检测血糖：空腹血糖：7周C57普食组、KKay普食组、KKay高脂诱导组的空腹血糖分别为6.9±0.87、7.2±0.76、6.8±0.58mmol/L，各组之间无显著差异。随机血糖：9.4±1.05，12.3±1.85，12.4±2.15mmol/L，与C57组相比，Kkay组血糖显著升高（P<0.05）,但未达糖尿病诊断标准。1.2常规检测空腹胰岛素：高脂诱导组胰岛素上升较快，且在6周时就已经与C57普食组出现差异，7周时KKay普食组开始与C57普食组出现差异，进一步分析C57的4-8周空腹胰岛素的95%的可信区间发现，7、8周时高脂诱导组出现了明显高胰岛素血症1.3OGTT：7周龄时三组小鼠均进行OGTT，空腹和2小时血糖均未达到糖尿病诊断标准。计算三组小鼠OGTT血糖的曲线下面积，仅见KKay高脂诱导组曲线下面积大于C57普食组（P<0.01）。2.干预研究：2.1血糖：15周龄时，C57普食组、KKay普食组、KKay高脂组、KKay运动组、Kkay DPP-4I组空腹血糖分别为7.8±1.10、9.52±1.53、21.14±6.41、7.92±1.00、6.96±2.99mmol/L,干预后二组空腹血糖与高脂组有明显差异，但与其它组比较未见明显差异；随机血糖分别为9.6±0.83、20.2±3.59、35.2±1.10、10.1±2.23、10.4±2.12mmol/L，干预组随机血糖较KKay对照组明显降低，并且都未达到糖尿病诊断标准。2.2胰岛素：C57普食组、KKay普食组、KKay高脂组、KKay运动组、Kkay DPP-4I组空腹胰岛素分别为0.567±0.12、0.973±0.27、0.732±0.16、1.147±0.18、1.271±0.13（ng/ml）。干预组的胰岛素水平都较KKay对照组高，并且有统计学意义，提示运动和DPP-4I两种干预都能减少β细胞的进一步损害。2.3糖耐量和胰岛素敏感性：相比正常C57和KKay干预组，KKay对照组的糖耐量明显下降，差异有统计学意义。干预组糖耐量与正常C57对照组糖耐量无显著差异。另外， KKay干预组和KKay对照组胰岛素敏感性都显著低于C57对照组，而经过8周的干预，干预组的胰岛素敏感性则明显要优于KKay对照组，尤其是高脂饮食组。2.4体重：C57普食组、KKay普食组、KKay高脂组、KKay运动组、Kkay DPP-4I组体重分别为27.3±2.43、32.8±2.48、41.8±1.98、28.1±2.26、28.4±2.02（单位：g）。干预组体重与C57组相比，体重无差异，而相比KKay普通饮食组和高脂饮食组，体重则明显减轻，并且有统计学意义（P<0.01）。2.5肝重：C57普食组、KKay普食组、KKay高脂组、KKay运动组、KKayDPP-4I组肝重分别为0.94±0.10、1.33±0.07、3.00±0.46、1.02±0.09、1.17±0.14（单位：g）。KKay对照组肝的重量相比干预组明显升高，高脂饮食组更加明显，提示运动和DPP-4I可以减轻脂质在肝脏的堆积。2.6肝脏内DAG和TG含量：C57普食组、KKay普食组、KKay高脂组、KKay运动组、Kkay DPP-4I组肝脏DAG分别为1.259±0.29、2.001±0.17、3.206±0.45、1.221±0.25、1.238±0.32ng/ml。相比KKay对照组，运动组和DPP-4I组的DAG明显降低，差异有统计学意义（P<0.01），提示干预组脂质合成明显减少。肝细胞内TG含量分别为40±8.5、115±12.5、247±15.3、53±7.6、71±10.8。干预组二组的肝脏TG含量较KKay对照组明显减少，差异有统计学意义（P<0.01）。2.7免疫组化定量肝脏内PKCε和IRS-1tyr的表达：KKay干预组PKCε表达比KKay对照组明显减少，尤其是KKay运动组。IRS-1tyr在KKay对照组表达减少，而干预组通过运动和DPP-4I干预后表达增多，尤其是KKay运动组。2.8Westernblot定量肝脏内PKCε和IRS-1tyr的表达：肝脏PKCε表达，在KKay对照组明显增多，尤其是高脂组，相比之下，KKay干预组PKCε表达明显减少，与C57组PKCε表达无明显差异。KKay对照组IRS-1tyr表达明显减少，相比之下，KKay干预组IRS-1tyr表达明显增多，与C57正常组IRS-1tyr表达无明显差异。3．结论:3.1.与C57小鼠比较，T2DM模型KKay鼠在7周龄时空腹血糖尚未出现明显升高，随机血糖已有升高倾向，但胰岛素水平已经明显升高，高脂饮食可加重这种代谢异常状态。从7周龄时解除高脂喂养方式，同时给予运动或DPP-4-I干预治疗8周，可见到血糖及胰岛素可达到与C57小鼠相似水平。3.2经普通饮食和高脂饮食喂养15周的KKay小鼠，肝脏内脂肪沉积明显。采用运动和DPP-4I干预的KKay小鼠肝脏脂质堆积明显减轻，与C57对照组相似。3.3运动和DPP-4I可通过减少DAG在肝脏的形成，降低PKCε的活性，从而减轻肝脏胰岛素抵抗，最终改善机体糖脂代谢紊乱。
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