花生壳中木犀草素的分离提纯及其抑菌性能研究

论文摘要

木犀草素（luteolin）是一种黄酮化合物,具有多种生物活性,在花生壳中有较高含量。本文以乙醇为提取剂从花生壳中提取木犀草素,优化提取工艺,采用多种方法进行分离纯化,并研究了木犀草素初步纯化物EP-1和精制物EP-2的抗菌活性。主要研究结果如下:1.相同条件下三种提取方法木犀草素得率依次为:水浴浸提＞微波提取＞超声波提取,即0.876%,0.801%,0.430%;水浴浸提所得干物中木犀草素含量为9.85%,微波提取干物中含量为15.18%;确定最优提取工艺为:微波功率900W,80%乙醇,提取时间70s,料液比1:20,提取率为82.66%。2.高效液相色谱法峰面积比法,分析了不同纯化物的纯度和可能存在杂质,乙酸乙酯萃取法使可检出水溶性成份得到富集,水沉法可明显降低乙醇液中水溶性成份含量,无水乙醇溶解干物质使木犀草素和另一种脂溶性成分得到富集,薄层展开系统可以实现样品的高度纯化。3.大孔树脂纯化法采用30%乙醇上样-30%乙醇洗脱和70%乙醇上样-70%乙醇洗脱所得产品纯度较高;无水乙醇上样法,样品处理量较大,目标物主要集中在70%乙醇洗脱部分;纯化工艺确定为无水乙醇上样,乙醇梯度洗脱,分段收集70%洗脱部分。4.初步纯化物（EP-1）对测试菌均有一定抑制或杀灭作用,具有广谱的抑菌性能,对细菌的杀灭效果尤为明显,对真菌的作用较差。在试验范围内EP-1的抑菌活性与浓度和时间成正相关,在相同的时间内,提取液的浓度越高,抑菌率越高;在相同浓度的提取液,作用时间越长,抑菌率也就越高。5.EP-2抗菌活性明显高于EP-1,并凸显出酚类物质的抗菌特点。其抑菌活性强于同浓度的山梨酸和亚硝酸钠,对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性与山梨酸和亚硝酸钠均无协同或拮抗作用;对啤酒酵母抑制作用与亚硝酸钠有一定协同效果;培养温度、pH对EP-2的抑菌效果有较大影响。6.通过生物显微镜对药液作用后的细菌形态进行了表征,结果显示:细菌的外膜及细胞壁结构和功能被破坏,出现大量菌体碎片,阻止营养物质向细胞内的运输,细胞质壁分离,导致其内容物外泄而起到抑菌作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 第一章 绪论
• 1.1 天然植物防腐剂的研究现状
• 1.1.1 天然植物防腐抑菌剂的研究与应用
• 1.1.2 天然抑菌物质抑菌效果的微生物测定法
• 1.1.3 天然植物防腐剂抑菌机理
• 1.2 花生壳的研究和开发现状
• 1.2.1 花生壳成分
• 1.2.2 花生壳中活性物质国内外研究现状分析
• 1.3 木犀草素的研究概况
• 1.3.1 木犀草素的理化性质
• 1.3.2 木犀草素的生理活性和应用价值
• 1.3.3 木犀草素的来源
• 1.4 黄酮类成分的提取和分离方法
• 1.4.1 黄酮成分的提取方法
• 1.4.2 黄酮成分的分离和纯化方法
• 1.4.3 黄酮检测方法
• 1.5 选题依据
• 1.6 研究内容
• 1.7 技术路线
• 第二章 花生壳中木犀草素的提取工艺研究
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 材料与试剂
• 2.1.2 仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 花生壳乙醇提取物成分初测
• 2.2.2 花生壳木犀草素测定方法的确定
• 2.2.3 花生壳原料处理
• 2.2.4 花生壳木犀草素的提取
• 2.3 实验结果及分析
• 2.3.1 花生壳乙醇提取物成分初测结果
• 2.3.2 花生壳木犀草素测定方法的确定
• 2.3.3 花生壳预处理方法的确定
• 2.2.4 花生壳木犀草素的提取
• 2.4 本章小结
• 第三章 花生壳乙醇提取物的分离纯化
• 3.1 实验材料与仪器
• 3.1.1 材料与试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 初步纯化
• 3.2.2 大孔树脂吸附纯化
• 3.2.3 聚酰胺柱层析
• 3.2.4 薄层层析（TLC）
• 3.2.5 萃取-水沉法纯化
• 3.2.6 碱溶酸析法纯化
• 3.2.7 样品纯度的检测
• 3.3 试验结果及分析
• 3.3.1 大孔树脂吸附法纯化
• 3.3.2 样品含量和纯度的测定
• 3.4 本章小结
• 第四章 花生壳乙醇提取物的抑菌性能研究
• 4.1 材料与仪器
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 菌种活化及菌液制备
• 4.2.2 不同溶解方式对抑菌活性的影响
• 4.2.3 药液浓度对抑菌效果的影响初测
• 4.2.4 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定
• 4.2.5 杀菌时间的确定
• 4.2.6 纯化样品的抑菌活性
• 4.2.7 环境因素对抑菌活性的影响
• 4.2.8 药液作用后菌体形态表征
• 4.3 试验结果与分析
• 4.3.1 菌浓度与吸光度的关系
• 4.3.2 不同溶解方式对抑菌活性的影响
• 4.3.3 药液浓度对抑菌效果的影响初测
• 4.3.4 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）的测定
• 4.3.5 杀菌时间的确定
• 4.3.6 纯化样品的抑菌活性
• 4.3.7 环境因素对抑菌活性的影响
• 4.3.8 药液作用后菌体形态表征
• 4.4 本章小结
• 第五章 结论、创新点与展望
• 5.1 结论
• 5.2 创新点
• 5.3 展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文