主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类耐药中的作用研究

论文摘要

[目的]探索主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药中的作用。[方法]收集1999年-2006年来自全国14家医院的不动杆菌95株，用扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析技术（ARDRA）进行分子水平上的菌株复核鉴定，以琼脂稀释法测定美罗培南、亚胺培南、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、环丙沙星、阿米卡星、米诺环素和多粘菌素共10种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC），按不同耐药表型进行分组。采用脉冲场凝胶电泳技术筛选相同克隆株。普通PCR扩增外排泵基因（adeB、adeD和adeM基因），实时荧光定量PCR检测外排泵基因表达水平。PCR扩增OXA型碳青霉烯酶及插入序列ISAbal，荧光定量PCR检测OXA-51-like基因表达水平。[结果]根据ARDRA鉴定结果有68株鲍曼不动杆菌和4株基因组3型不动杆菌共72株菌入选实验研究。根据药敏MIC所示的耐药表型不同将菌株分为以下三组：对碳青霉烯类耐药组，对碳青霉烯类敏感同时对其他至少5种抗菌药物耐药组，对10种所测抗菌药物全部敏感组。PFGE克隆筛选显示包含不同耐药表型的克隆有A克隆，鲍曼不动杆菌32R和32S属于同一克隆，基因组3型不动杆菌4AS6及其3个突变子4AS6-1L、4AS6-2L和4AS6-3L亦属于同一克隆。普通PCR扩增外排泵基因adeB、adeD和adeM阳性率分别为81．94％、0％和100％。碳青霉烯类耐药株32R的两种外排泵基因adeB和adeM相对表达量分别比碳青霉烯类敏感株32S增加了2．79倍和4．04倍。基因组3型不动杆菌4AS6、4AS6-1L、4AS6-2L和4AS6-3L的adeB基因表达均低于检测下限；adeM外排基因表达量随突变子对碳青霉烯类MIC的升高而增加。A克隆菌株中全敏感组两种外排基因表达量都很低，碳青霉烯类耐药组外排泵adeB基因的表达量高于碳青霉烯类敏感组。P克隆菌株adeM基因表达水平高于其他克隆。忽略遗传背景，不同耐药表型组间adeB、adeM基因表达量比较，全敏感菌株中表达量极少，在多重耐药菌株中表达增加；碳青霉烯类耐药组和敏感组间无统计学差异。所有菌株adeD基因表达量均低于检测下限，可能该基因在不动杆菌中少有分布。共有7株鲍曼不动杆菌在OXA-51-like基因上游存在ISAbal插入序列。在碳青霉烯类药物耐药或中介菌株中，碳青霉烯酶OXA-51-like表达量要高于敏感株。OXA-51-like上游的插入序列，可能激活启动子，导致OXA-51-like酶高度表达，介导对碳青霉烯类耐药。鲍曼不动杆菌对美罗培南耐药性高于亚胺培南可能和OXA-51-like基因和外排泵基因（adeB和adeM）表达增加有关。[结论]主动外排系统在不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药中发挥重要作用，外排泵表达增加可介导对多种抗菌药物敏感性降低。分析不动杆菌耐药机制时应将产酶、外膜蛋白缺失和外排泵表达增加综合考虑。应加强感染控制和抗菌药物的干预政策，防止泛耐药不动杆菌暴发流行。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 菌株收集、分子鉴定及抗菌药物敏感性测定
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 采用脉冲场凝胶电泳技术筛选相同克隆株
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 普通PCR扩增外排泵基因和实时荧光定量PCR技术检测外排泵基因表达水平
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第四部分 实时荧光定量PCR技术检测碳青霉烯酶OXA-51-like表达量水平和上游插入序列分析
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 研究生期间发表论文列表
• 附件 研究生在读期间发表的论文
• 综述1 细菌质粒介导的喹诺酮类药物的耐药机制研究进展
• 综述2 不动杆菌中主动外排系统的研究进展
• 研究 一 头孢美唑对产ESBLs肠杆菌和厌氧菌体外敏感性分析
• 研究 二 采用扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析技术鉴定不动杆菌
• 个人简历
• 致谢