李小琴(内蒙古包头市第四医院病理科010020)
【关键词】冰醋酸HE制片应用
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）04-0075-02
HE染色在病理诊断学中为一个经典方法，技术工作中，合理应用冰醋酸可以有效地提高HE制片优片率。缩短制片时间。
1材料与方法
1.1材料：(1)混合固定液，甲醛冰醋酸(甲醛60ml冰醋酸25ml水415ml)。
(2)苏木素染色：苏木素2.5g,硫酸铝钾25g,蒸馏水350ml,碘酸钠0.5g冰醋酸10ml甘油150ml。
(3)伊红染液：伊红1.25g95%无水乙醇500ml配好后加入适量冰醋酸。
1.2方法：与HE制片过程中，只是组织将固定用甲醛冰醋酸液，而染片时也加入冰醋酸。
2观测
120张病理切片结果:60张病理切片用甲醛固定;60张用甲醛冰醋酸液固定.用甲醛冰醋酸固定及用伊红加冰醋酸染液结果：细胞核细胞质结构比对清晰，染色鲜艳，均匀。染色时间缩短。
3讨论
冰醋酸(CH2COOH)为带有刺激味的无色酸性液体，分子量60.05;小于15度时易结合成冰。17度时融化。它可以与各种比例的水和无水乙醇混合。
标本固定时，用4%中性甲醛液，该液渗透率力强，固定均匀，用时对组织收缩较少。但经乙醇收缩脱水后收缩较大。而且不能沉淀白蛋白核蛋白等，不能完整地保存染色体结构。如果而选用甲醛冰醋酸液理由：甲醛可以和蛋白质结合。对脂肪神经固定也较好。冰醋酸可以沉淀核蛋白，也能很好保存染色体，对其组织有膨胀作用。解决了甲醛固定乙醇脱水后组织收缩问题。两者互补，使固定达到良好效果。
苏木素染色时细胞核内的染色质主要是脱氧核糖核酸，它的双螺旋结构中两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性溶液以离子键或氢键结合而着色，细胞质内主要成分是蛋白质，为两性化合物。细胞质的染色与ph值有密切关系。当ph值调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞质外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色[1]。当ph调到6.7-6.8时，大于蛋白质等电点，表现为酸性电荷，带电荷的阳离子，可被带正电荷的染料染色。细胞核?和?细胞质难以区分。因此必须把ph值调到细胞胞质等电点以下。在染液中加入冰醋酸使细胞质带正电荷(阳离子)就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。
伊红染液是酸性染液，在水中离解成带负电荷的阳离子与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞质染色。加入冰醋酸后，起到促染作用[2]。只能增强染料的染色能力，不参与染色反应。
据上述原理，甲醛冰醋酸固定通常浓度为5%，同时组织脱水前一定要充分水洗，苏木素染色时。冰醋酸的加入量可直接影响苏木素精的着色能力和清晰度，加入会形成核浆共染背景不清晰，加多了抑制了苏木素和铝离子的结合。色淀形成减少。着色能力下降。如果染色液使用时间过长,可以再加入冰醋酸,但伊红染液中冰醋酸应小于1%,否则染液有效成分降低,染色效果降低。
参考文献
[1]章载良,顾元析,郑晓瑾等,冰醋酸在常规HE染色中应用.
中华病理杂志2009,10,389.
[2]傅从燕,肖德胜,钟于霞等,冰醋酸在调解HE染色中作用,临床与实践病理学杂志,2011,06,369-370.