心脉通对大鼠心肌细胞氧化损伤时Akt/PKB、eNOS表达的影响

论文摘要

目的:利用H2O2造成心肌细胞氧化损伤模型,观察在氧化损伤状态下心脉通对PKB及eNOS表达的影响。方法:1:原代大鼠心肌细胞培养（酶消化法）及鉴定,并利用H2O2造成心肌细胞氧化损伤状态,模拟急性心肌缺血时心肌的损伤过程。2:心肌细胞原代培养,将细胞培养于24孔板上并于5%CO2,95%湿度环境下,将细胞随机分为正常组,模型组,心脉通组,DAng-I组,细胞培养到第三天的时候,分别给于以下处理:正常组用含有15%正常大鼠血清的培养基培养24h,然后加入H2O2和无血清的DMEM再培养6h。模型组将培养基换成15%正常大鼠血清的DMEM液,培养24h后换成无血清DMEM液再滴加H2O2液（H2O2的终浓度为200μmol/L）,H2O2作用6h。心脉通组将培养基换成15%含药大鼠血清的DMEM液培养24h后换成无血清的DMEM液再滴加H2O2液（H2O2的终浓度为20μmol/L）,H2O2作用6h。DAng-I组将培养基换成15%含正常大鼠血清和DAng-I（DAng-I的终浓度是5μmol/L）的DMEM液培养24h后换成无血清的DMEM液再滴加H2O2液（H2O2的终浓度为20μmol/L）,H2O2作用6h。最后将培养板从培养箱中取出,收集细胞进行细胞免疫化学,总RNA提取,PKB及eNOS的RT-及PCR反应。结果:1:成功利用H2O2造成心肌细胞氧化损伤模型,并进行鉴定。2:PKB磷酸化水平在正常组低,而在模型组和药物组的磷酸化水平均上调,且和模型组相比药物组表达水平更高（P＜0.05）。但DAng-I组的表达和心脉通组相比无差异（P＞0.05）。PKB在转录水平也表现出了相似的变化。3:eNOS的表达正常组最高,在其它组的表达下调,药物干预组的表达水平均较模型组高（P＜0.05）,但心脉通组与DAng-I组之间相比无统计学差异（P＞0.05）。结论:1:H2O2在20μmol/L时对心肌细胞产生损害。2:心脉通及DAng-I有对抗氧化应激引起的细胞损伤作用,此种保护作用可能与PKB和eNOS的活化有关。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 前言
• 1 现代医学对心肌缺血的认识及心肌缺血防治现状
• 2 本实验立题依据
• 2O₂致心肌细胞损伤作用'>第一部分 心脉通和DAng-I抗H₂O₂致心肌细胞损伤作用
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第二部分 氧化损伤状态下PKB及eNOS的表达变化
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 全文总结及展望
• 参考文献
• 附图
• 主要简略语中英文对照表
• 在读期间发表的论文
• 致谢