川牛膝多糖的提取工艺及其对肉鸡免疫调节作用的研究

论文摘要

多糖广泛分布于多种生物体中,尤其是动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,是构成生命的分子基础之一。其中植物多糖具有非常重要的生理活性,这些多糖参与生物体中细胞的各种活动,具有抗肿瘤和免疫促进、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂、抗疲劳、抗衰老等作用。川牛膝多糖（Achyranthes bidentata PolysaccharidesABP）是从川牛膝（Cyathula offinalis Kuan）根中提取的一种生物活性多糖。有关川牛膝多糖的研究大多集中在川牛膝多糖含量的测定,初步分离以及抗肿瘤试验研究方面。为了深入研究川牛膝多糖,本研究对其提取工艺、含量测定以及对肉鸡免疫功能的调节作用进行了系统研究,并初步探讨了其免疫调节机制。主要研究结果如下:1、通过多因素试验和正交试验确立了川牛膝多糖（ABP）经典“水提醇沉”法的最适条件为:提取温度100℃,提取时间8h,料液比1:20,乙醇浓度95%;在上述提取条件下提取,测得多糖得率为50.41%,含量为69.33%。2、通过动物试验,研究了川牛膝多糖对肉鸡血清抗体和血液生化指标的影响。结果表明川牛膝多糖组血清中免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）、免疫球蛋白A（Immunoglobulin A,IgA）和免疫球蛋白M（Immunoglobulin M,IgM）的抗体水平均显著高于对照组,与对照组相比差异显著（0.01＜p≤0.05）;川牛膝多糖组各血液生化指标的变化与对照组相比差异不显著。川牛膝多糖可通过提高血清水平来提高机体的免疫能力且对机体各项血液生化指标无不良影响。3、研究了川牛膝多糖对肉鸡红细胞免疫及外周血淋巴细胞免疫功能的影响。结果表明川牛膝多糖组与对照组相比淋巴细胞ANAE阳性率[Acid-α-naphthalene Acetate Esterase（ANAE）positiverate in T-lymphocyte]显著高于对照组,红细胞玫瑰花环率(Erythrocyte C3b rosette rates,E-C3bRR)在21日龄后显著高于对照组,红细胞免疫复合物花环率（Erythrocyte immune complex rosette rates,E-ICRR）、T淋巴细胞玫瑰花环总花环率（T-lymphocyte erythrocyte totalrosette rates）以及T淋巴细胞玫瑰花环活性花环率（T-lymphocyte erythrocyte active rosette rates）各检测数据均显著高于对照组,并呈现出明显的强度-效应关系。4、川牛膝多糖对肉鸡免疫器官及其免疫活性细胞动态变化的影响表现为:川牛膝多糖组胸腺、脾脏和法氏囊脏器指数升高,各脏器组织内T淋巴细胞（Tlymphocyte）和巨噬细胞（Macrophage）的酸性α醋酸萘酯酶（Acid-α-naphthalene acetate esterase,ANAE）阳性率升高,与对照组相比差异显著。由此可见,川牛膝多糖能促进免疫器官的发育,增加免疫器官组织中T淋巴细胞和巨噬细胞的数量,从而增强机体的免疫应答功能。5、为了初步探讨川牛膝多糖免疫调节作用的机制,研究了川牛膝多糖对鸡免疫器官的组织学和超微结构的动态影响。结果表明:光镜下,川牛膝多糖组与对照组相比,法氏囊各组织结构更加成熟,其粘膜平整,皮髓质分界相对早而清楚,皮质增厚,淋巴滤泡直径增加;脾脏体积增大,红白髓分界明显,动脉鞘增厚,脾小体增大增多,生发中心明显;胸腺的皮髓质分化早而明显,皮质增厚,胸腺小体数量增多,体积增大相对明显;各组织中淋巴细胞排列与对照组相比均更加致密,与同日龄相比,淋巴细胞发育较成熟;电镜下,川牛膝多糖组脾脏中的淋巴细胞形态均一,核仁增多,核染色质边移。由此可见,川主富没汁膝多糖能促进法氏囊、脾脏和胸腺的早期发育。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 多糖作为免疫调节剂的研究进展
• 1、文献综述
• 1.1 免疫调节剂的概念及分类
• 1.2 免疫调节剂的作用机制
• 1.2.1 一般免疫调节剂的作用机制
• 1.2.2 多糖的免疫调节机制
• 1.3 多糖的免疫调节作用
• 1.3.1 多糖对细胞因子的作用
• 1.3.2 多糖对网状内皮系统和补体系统的作用
• 1.3.3 多糖对T、B淋巴细胞的作用
• 1.3.4 多糖对自然杀伤细胞的作用
• 1.3.5 多糖对巨噬细胞（Mφ）的作用
• 1.3.6 多糖对抗体的作用
• 1.3.7 多糖对调节神经-内分泌-免疫系统的作用
• 1.4 多糖作为免疫调节剂的研究进展
• 1.4.1 促进免疫器官发育
• 1.4.2 免疫调节作用
• 1.4.3 抗菌、抗病毒作用
• 1.4.4 降血糖、降血脂作用
• 1.4.5 抗衰老作用
• 1.4.6 抗炎作用
• 1.4.7 其他作用
• 2、选题背景和实验研究的目的与意义
• 2.1 选题背景
• 2.2 实验研究的目的与意义
• 第二章 川牛膝多糖的制备及含量测定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验药材
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 川牛膝粗多糖的提取
• 1.2.2 正交实验
• 1.3 糖含量测定
• 1.3.1 硫酸-苯酚法分析总糖含量
• 1.3.2 3,5—二硝基水杨酸比色法分析单糖含量（DNS法）
• 1.3.3 考马斯亮蓝G—250显色法分析蛋白质含量
• 1.3.4 多糖含量计算
• 2 结果与分析
• 2.1 川牛膝多糖含量的测定
• 2.2 硫酸-苯酚法测定粗多糖中总糖的含量
• 2.3 DNS法测定粗多糖中单糖的含量
• 2.4 川牛膝粗多糖中多糖含量及川牛膝中多糖得率
• 2.5 川牛膝多糖中蛋白质含量的测定
• 3 讨论
• 3.1 硫酸-苯酚法测总糖含量
• 3.2 Sevag法除蛋白质
• 3.3 最佳提取工艺的选择
• 第三章 川牛膝多糖对鸡血清抗体和血液生化指标的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 川牛膝多糖
• 1.2 实验动物及分组
• 1.3 方法
• 1.3.1 血清抗体IgG、IgA、IgM的含量
• 1.3.2 血液生化指标的测定
• 1.4 统计处理
• 2 结果与分析
• 2.1 血清抗体检测结果
• 2.2 血液生化指标检测结果
• 3 讨论
• 第四章 川牛膝多糖对鸡红细胞免疫及外周血淋巴细胞免疫功能的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 川牛膝多糖
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 实验动物及分组
• 1.3 方法
• +）染色法测定外周血T淋巴细胞'>1.3.1 酸性α-醋酸萘酯酶（ANAE⁺）染色法测定外周血T淋巴细胞
• 3bR)'>1.3.2 红细胞玫瑰花环试验(E-C_3bR)
• 1.3.3 红细胞免疫复合物花环试验（E-ICR）
• 1.3.4 T淋巴细胞花环试验
• 1.3.5 统计处理
• 2 结果与分析
• +阳性率的变化'>2.1 饲喂川牛膝多糖后鸡外周血T淋巴细胞ANAE⁺阳性率的变化
• 2.2 红细胞玫瑰花环试验结果
• 2.3 红细胞免疫复合物花环试验结果
• 2.4 T淋巴细胞花环试验结果
• 2.4.1 鸡淋巴细胞玫瑰花环总花环率试验结果
• 2.4.2 鸡淋巴细胞玫瑰花环活性花环率试验结果
• 3 讨论
• 第五章 川牛膝多糖对鸡免疫器官及其免疫活性细胞动态变化的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 川牛膝多糖
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 实验动物及分组
• 1.3 方法
• 1.3.1 脏器指数的测定
• +染色）'>1.3.2 非特异性酸性酯酶染色（ANAE⁺染色）
• 1.3.3 判断标准
• 1.3.4 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 川牛膝多糖对鸡免疫器官脏器指数的影响
• 2.2 川牛膝多糖对免疫器官中T淋巴细胞动态变化的影响
• 2.3 川牛膝多糖对免疫器官中巨噬细胞动态变化的影响
• 3 讨论
• 第六章 川牛膝多糖对鸡免疫器官组织学和超微结构影响的动态观察
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 川牛膝多糖
• 1.1.2 主要试剂
• 1.2 实验动物及分组
• 1.3 方法
• 1.3.1 样品采集与处理
• 1.3.2 组织切片的制作
• 1.3.3 超微切片的制作
• 2 结果与分析
• 2.1 免疫器官的组织学变化
• 2.1.1 法氏囊的组织学变化
• 2.1.2 脾脏的组织学变化
• 2.1.3 胸腺的组织学变化
• 2.2 川牛膝多糖对鸡脾脏超微结构的影响
• 2.3 法氏囊淋巴滤泡直径检测结果
• 3 讨论
• 第七章 结论
• 参考文献
• 附图及说明
• 致谢
• 攻读学位期间学术论文的发表情况