白藜芦醇抗衰老抗氧化试验及其相关机理研究

论文摘要

白藜芦醇（resveratrol, RES）是一种存在于葡萄、花生以及虎杖等植物中的天然多酚,适度的饮用红酒有助于降低人类的心血管疾病发生几率。现有研究表明RES具有抗肿瘤、抗炎症、免疫调节、抗氧化、抗心血管疾病等广泛的药理活性。本论文分别以秀丽线虫和昆明种小鼠为研究对象,对RES的抗衰老与抗氧化的功效及其分子机制进行了初步研究。首先探究了RES对模式生物秀丽线虫寿命及相关基因表达的影响。设定50mg/L、100mg/L为RES终浓度,观察正常生存温度25℃和热应激温度35℃下两浓度RES对秀丽线虫寿命的影响,以与衰老相关的daf-16、sod-3、hsp-16.2三个基因探究RES对秀丽线虫寿命影响的分子机制。结果表明,100mg/LRES能显著（P<0.05）延长正常及热应激条件下线虫的寿命,基因表达分析表明,daf-16、sod-3、hsp-16.2基因均明显上调,证明RES确实具有延缓活体动物衰老的功效,上述三个基因可能参与该过程的调节。然后建立了昆明种小鼠的高血脂模型,探究了RES抗脂质过氧化能力及相关通路的基因表达差异。设定模型组、高（60mg/Kg/day）、中（30mg/Kg/day）、低（10mg/Kg/day）剂量RES组、阳性对照组（脂比妥—降脂药物）以及空白对照组,通过检测各组血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平来评价模型建立是否成功,检测肝脏SOD和MDA来评价机体抗氧化能力和脂质氧化水平。以脂质代谢通路中的ACC1, CYP7A1和CPT-1表达差异评价RES对脂质代谢调节机制的影响,以肝SOD-3基因表达的差异评价其对抗氧化机制的影响。结果表明,不同剂量的RES能明显降低血清内TG、LDL-C和TC含量,高剂量的影响最为显著（P<0.05）,基因表达分析表明可能与其上调ACC1和CYP7A1,下调CPT-1有关；RES能显著提高小鼠肝脏内SOD水平,降低MDA浓度,其中以高剂量组影响最为显著（P<0.01）,表明RES具有抗氧化能力,基因表达分析表明其作用机理可能与其上调SOD-3的基因表达有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 1 前言
• 1.1 白藜芦醇的概述
• 1.1.1 白藜芦醇的性质及特点
• 1.1.2 白藜芦醇的主要功能
• 1.2 秀丽线虫（Caenorhabditis elegans）介绍
• 1.2.1 秀丽线虫生物学特性
• 1.2.2 秀丽线虫作为模式生物的发展史及研究进展
• 1.2.3 秀丽线虫作为衰老研究模式生物的优势
• 1.3 衰老概述
• 1.3.1 衰老概念
• 1.3.2 衰老的分子机制
• 1.3.3 衰老的研究进展
• 1.3.4 衰老相关基因与寿命
• 1.4 抗脂质氧化的研究
• 1.4.1 脂质代谢通路
• 1.4.2 脂质氧化相关基因研究进展
• 1.5 本课题的研究内容与目的意义
• 1.5.1 本课题的研究内容
• 1.5.2 本课题的研究目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 实验仪器
• 2.1.4 溶液及培养基
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 白藜芦醇的环糊精包埋
• 2.2.2 线虫实验
• 2.2.3 小鼠实验
• 2.2.4 基因的表达分析
• 2.2.5 数据处理工具与统计方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 不同浓度白藜芦醇对线虫寿命影响作用
• 3.1.1 正常培养条件下（25℃）不同浓度白藜芦醇对线虫寿命影响作用
• 3.1.2 热应激条件下（35℃）不同浓度白藜芦醇对线虫寿命影响作用
• 3.2 与线虫寿命相关的基因表达分析
• 3.2.1 线虫RNA的提取
• 3.2.2 RT-PCR扩增目的基因及相关分析
• 3.3 小鼠生理生化指标
• 3.3.1 最后体重,肝脾肾指数
• 3.3.2 SOD和MDA检测结果
• 3.3.3 血脂检测结果
• 3.4 分子机制实验结果
• 3.4.1 RNA样品检测结果
• 3.4.2 半定量RT-PCR产物电泳检测结果
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 8 致谢
• 附录