性激素对人网膜前脂肪细胞分泌瘦素和脂联素的影响

论文摘要

目的:通过体外原代培养人大网膜前脂肪细胞,并诱导其分化为成熟脂肪细胞,研究这一过程中性激素对其分泌瘦素和脂联素的影响。方法:1、选择择期开腹手术病人的新鲜脂肪组织,要求无全身代谢及内分泌疾病,无服用干预糖及脂肪代谢的药物史。年龄范围(40±8)岁,体重指数(BMI)＜25kg/m~2。2、采用胶原酶消化的方法分离培养人大网膜前脂肪细胞并诱导其分化,通过对细胞形态学的观察及油红O脂肪染色抽提法对细胞进行鉴定,观察原代培养人前脂肪细胞增殖和分化的过程。3、分别在前脂肪细胞增殖和分化过程中隔日收集基础组、分化组及性激素干预组的细胞上清液,用酶联免疫吸附法同批检测所收集细胞上清液中瘦素和脂联素蛋白含量。4、待前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞后分别用不同浓度的雌二醇和睾酮干预24h同时收集细胞上清液,用酶联免疫吸附法同批检测所收集细胞上清液中瘦素和脂联素蛋白含量。5、统计学处理:分析结果用“均数±标准差”表示,P＜0.05有统计学意义。结果:1、成功培养了原代人网膜前脂肪细胞。前脂肪细胞形态与成纤维细胞相似,人工诱导分化后,第4天左右可见胞浆内出现反光的脂质小滴,随分化进程脂滴逐渐增多,16天左右大部分分化为成熟脂肪细胞。2、前脂肪细胞增殖期可检测到低水平的瘦素分泌。在分化期,瘦素分泌量随诱导分化进程而持续增多,于第16天达高峰,之后保持高水平分泌状态至诱导分化完成。雌二醇干预组各时间段的瘦素分泌水平较分化组有明显的升高,而睾酮干预组则明显降低。前脂肪细胞增殖期始终未检测到脂联素的分泌,在分化诱导到第5天才检测到低水平的分泌,此时倒置显微镜下已可观察到有内含脂滴的脂肪细胞出现,第11天分泌量达最高峰,第16天分泌量可见明显下降。而雌二醇和睾酮干预组各时间段的脂联素分泌水平较分化组均明显降低(P＜0.01)。3、雌二醇对脂肪细胞分泌的瘦素有促进作用,而高浓度的睾酮对瘦素的分泌有抑制作用(P＜0.05)。4、雌二醇和睾酮对脂肪细胞分泌的脂联素均有抑制作用(P＜0.05)。结论:1、成功培养了人网膜前脂肪细胞,验证体外细胞培养模型的可行性和实用性,为研究肥胖及脂肪细胞因子的相互作用提供了细胞学平台。2、离体条件下,一定浓度的雌二醇对瘦素的分泌有促进作用,而睾酮对瘦素的分泌有抑制作用,雌二醇和睾酮对脂联素的分泌均为抑制作用,为肥胖及相关代谢性疾病的性别差异提供实验室依据。

论文目录

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