白介素12基因瘤内转导治疗原发性肝癌的实验研究

论文摘要

目的:1、建立人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠复合模型;2、探讨白细胞介素12基因瘤内注射对肝癌荷瘤小鼠的治疗效果,并分析可能的机理。方法:1、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人外周血淋巴细胞,构建人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠复合模型;2、随机将模型小鼠分为三组,在第1、4、7天分别瘤内注射经致死量射线照射的转染有人IL-12基因的肺癌细胞株9597/IL-12、空载体肺癌细胞株9597/plasmid和PBS;3、观测小鼠瘤体积的变化,以及小鼠体重、一般状况的变化,计数外周血中白细胞数,ELISA法检测ALT、AST水平;4、CBA和ELISA检测外周血和瘤块中Th1/Th2/Th17类细胞因子和IL-12水平;5、流式细胞术检测瘤块中细胞周期和凋亡情况;6、免疫组化法检测瘤块中免疫细胞和微血管密度。结果:1、皮下注射HepG2细胞并腹腔内注射人PBL后NOD/SCID小鼠总体成瘤率100%,HE染色观察瘤块镜下结构,可见小鼠肿瘤组织结构、细胞形态特点与人肝癌组织结构相类似,肿瘤微环境中存在人淋巴细胞（CD3+ T细胞5.63±3.48个/HP,CD4+ T细胞3.21±2.83个/HP,CD8+ T细胞1.18±2.20个/HP）和细胞因子（IL-2为4.11±0.80pg/ml,IL-4为4.24±0.98pg/ml,IL-6为3.12±0.43pg/ml,IL-10为2.86±0.54pg/ml,TNF为5.32±0.63pg/ml,IFN-γ为11.19±2.36pg/ml,IL-17A为85.37±12.21pg/ml）;2、治疗组小鼠在瘤内注射后肿瘤生长明显受到抑制,第28天时瘤体积为956.51±257.27mm3,小于空载体组和对照组;3、治疗组小鼠在治疗期间体重与空载体组、对照组小鼠无明显差异（P>0.05）;4、小鼠外周血中的白细胞数在瘤内注射后第7天,治疗组（9.32±1.93×109个/L）高于空载体组（7.74±1.74×109个/L）和对照组（7.38±1.37×109个/L）,第21天治疗组（8.04±1.46×109个/L）、空载体组（7.97±1.20×109个/L）高于对照组（6.42±1.68×109个/L）,第28天三组之间无明显差异（P>0.05）;5、三组小鼠外周血AST水平不存在明显差异（P>0.05）,治疗组小鼠ALT水平在第14天升高（78.76±20.33IU/L）,第28天恢复（35.56±16.20IU/L）;6、治疗组小鼠外周血中IL-12在第7天（13.82±9.15pg/ml）、14天（9.08±3.41pg/ml）、21天（3.13±2.36pg/ml）、28天（2.24±1.44pg/ml）高于另两组小鼠,IL-2和IFN-γ在第21天（分别为4.94±2.66 pg/ml,5.63±1.97 pg/ml）高于另两组小鼠;7、肿瘤微环境中,治疗组小鼠IL-2、IFN-γ、IL-12水平（分别为5.71±1.94pg/ml,12.61±4.29pg/ml,3.06±1.05pg/ml）高于空载体组和对照组,而IL-17A水平（67.40±16.51pg/ml）相反;治疗组小鼠CD3+ T细胞（9.18±3.72个/HP）、CD4+ Th细胞（5.62±2.15个/HP）、IFN-γ+ Th1细胞（4.22±1.59个/HP）、S-100 +树突状细胞（10.24±3.39个/HP）水平较另两组小鼠高,MVD（4.32±2.04个/HP）较之比低;8、治疗组小鼠肿瘤组织中G0/G1期比例上升,S期比例下降,且均较对照组小鼠有统计学差异（P<0.05）,且治疗组小鼠瘤块中凋亡细胞比例（25.54±7.13%）较另两组多（分别为12.42±3.62%,17.31±3.32%）。结论:1、NOD/SCID小鼠皮下注射HepG2细胞,成瘤后腹腔注射人PBL,可以成功构建人HCC-hu-PBL- NOD/SCID复合模型,以模拟人肝癌组织微环境;2、人IL-12基因瘤内注射可以有效抑制人HCC-hu-PBL-NOD/SCID小鼠模型中肿瘤的生长;3、IL-12基因治疗的副反应较轻,仅见ALT一过性的升高和轻度的腹泻。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 人 HCC-hu-PBL-NOD/SCID 小鼠复合模型的建立
• 材料与试剂
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 人 IL-12 基因瘤内转导治疗 HCC-hu-PBL-NOD/SCID 小鼠模型
• 材料与试剂
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献