兔24小时房颤致心房肌和肺静脉电重构、结构重构和神经重构的机制及药物干预作用的研究

论文摘要

目的：1.应用心内电生理技术研究兔心房快速起搏（RAP）对心房AERP和MAP的影响,探讨兔24小时RAP所致心房肌电重构（ER）作用；应用MEA技术研究兔RAP对心房肌和PV场电位时程（fAPD）的影响及药物干预作用,探讨参与房颤（AF） ER的电生理指标的变化和药物干预作用；2.建立24hRAP模型,观察AF时右心耳（RAA）和左上肺静脉（LSPV）的组织学改变,揭示心房肌结构重构（SR）和肺静脉（PV）异常电活动产生和维持的相关机制；3.研究RAP兔RAA致外在自主神经放电活动变化及RAA和PV肌袖内在自主神经密度变化,揭示自主神经系统（ANS）在AF发生和维持中的作用。方法：1.成年新西兰大白兔,体重2.5-3kg,雌雄不拘,由新疆医科大学动物实验中心提供,动物质量属于一级标准。兔20只随机分为二组：假手术组、模型组各10只。经颈内静脉将电极置入右心房。以600次／分行RAP,同时分析在0、4、8、12和24h的心房有效不应期（AERP200和AERP150）, AERP频率适应性和MAPD;兔20只随机分为二组：假手术组、模型组各10只。经颈内静脉将电极置入右心房。以600次／分行RAP,同时分析在0和24h的RAA和LSPV心肌袖fAPD,给予心房肌模型组药物CdCl2、TEA、4-AP、BaCl2和AMI观察药物作用的离子通道对电生理指标的影响。2.成年新西兰大白兔20只,体重2.5-3kg,雌雄不拘,由新疆医科大学动物实验中心提供,动物质量属于一级标准。实验动物随机分为2组,假手术组（n=10）,模型组（n=10）。24h RAP后,迅速开胸取心脏,剪下RAA和LSPV,经HE染色、PAS染色和Masson染色行组织学观察。3.成年新西兰大白兔20只,体重2.5-3kg,雌雄不拘,由新疆医科大学动物实验中心提供,动物质量属于一级标准。随机分为2组,假手术组（n=10）,模型组（n=10）。以自主神经放电活动变化作为快速房颤神经重构的参考指标,统计指标是放电积分幅度（AID）,放电时程（TCD）,放电间隔时程（TCDI）。并应用荧光免疫技术研究自主神经分布密度和再生。结果：1.假手术组在不同基础刺激周长作用下和时间点AERP没有显著改变（P<0.05）。模型组在起搏P8和P24后,与P0相比,AERP200明显缩短（P<0.05）,分别缩短了11ms和12ms;与P0相比,AERP150在起搏P8和P24后明显缩短（P<0.05）,分别缩短了11 ms和13ms。假手术组在不给予心房快速刺激的条件下观察24h,P4-8时间段AERP200-150缩短程度与P0比较差异无显著性（P>0.05）,频率适应性无明显变化,S1S1间期越短,AERP越短。模型组随着起搏时间的延长,S1S1间期越短,P8时间段AERP200-150与P0比较缩短程度减小,差异有显著性（P<0.05）。假手术组在实验的时间段内右房游离壁MAPD90无明显差别（P>0.05）。RAP 8h,起搏组右房游离壁MAPD90较P0有明显缩短,从起搏前（112.50±9.57）ms至起搏8h分别缩短到（51.25±4.79）ms,分别缩短了61.25ms（P<0.05）。RAA场电位形态近似于倒置心房肌AP的膜电位曲线,FP的负相波幅度为（-255±27.92）μV（n=10）,fAPD为（188.33±18.29）ms（n=10）。24h RAP兔后,fAPD为（173.91±6.83）ms,与正常对照组相比,缩短了14.42ms（P=0.007,n=10）。CdCl2灌流心房组织10min后,RAA fAPD由（178.33±7.85）ms延长到（206.67±9.70）ms（P=0.0015,n=10）。TEA灌流,RAA fAPD由（176.67±8.66）ms延长到（196.11±10.76）ms,fAPD延长了10.55ms（P=0.012,n=10）。5mmol/L4-AP灌流,RAA fAPD由（169.38±10.56）ms延长到（188.56±13.82）ms, fAPD延长了19.18ms（P=0.005,n=10）。10-4mol/L BaCl2的灌流,RAA fAPD由（182.22±12.87）ms延长到（191.11±13.09）ms, fAPD延长了8.89ms（P=0.039,n=10）。2×10-6mmol/LAMI灌流,RAA fAPD由（167.38±13.67）ms延长到（185±15.14）ms, fAPD延长了17.62ms（P=0.002,n=10）。PV假手术组场电位的负相波幅度为（189.44±17.04）μV, fAPD为（187.67±16.33）ms（n=10）。模型组LSPV的振幅为（-53.75±8.76）μV, fAPD为（170.83±10.65）ms。2.光镜下假手术组心房肌和PV的HE染色肌纤维呈纵行排列,横纹清楚；模型组结果示肌纤维走行方向各异,间隙较大,横纹不清,胞浆空泡化,细胞肿胀。Masson染色结果显示,假手术组胶原纤维为蓝绿色,少量分布于肌纤维之间；模型组大量胶原纤维相互连接成网状,排列紊乱。PAS染色结果显示,假手术组PAS染色阴性,胶原质呈现粉红色,未发现有糖原积聚；模型组细胞核呈现蓝色,胶原质呈现粉红色,糖原积聚呈现深紫红色。3.与假手术组比较,模型组迷走神经AID增加了18.02μV·ms,差异有显著统计学意义（P=0.001）；而TCD （P=0.317）和TCDI （P=0.755）无延长,差异无统计学意义；模型组交感神经AID降低了11.95μV·ms,差异有显著统计学（P=0.002）；而TCD延长了0.37s,TCDI缩短了0.17s,差异均有显著统计学意义（P=0.000）。免疫荧光染色结果显示,右心耳假手术组GAP43、ChAT和TH依次呈现阳性,弱阳性,弱阳性。模型组GAP43、ChAT和TH依次呈现强阳性,阳性,阳性。肺静脉假手术组GAP43阳性,模型组强阳性。结论：1.AF时心房ER以AERP缩短,频率适应不良及MAPD90缩短为特点。应用MEA测定24h RAP心房肌和PV心肌袖的fAPD缩短；心房肌钙离子通道和参与ER的钾离子通道重构。2.AF后的RAA和PV细胞肥大、空泡变性、糖原积聚和纤维结缔组织增生等病理改变。SR有利用微折返的产生和维持,说明持续快速高频刺激下,PV易于发生房性心律失常有相应的组织学依据。3.24h RAP后,RAA和PV神经纤维存在形态、分布及的密度改变,即神经重构,其可促进AF的维持。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 24小时快速起搏兔右心房致右心房和肺静脉电重构的研究
• 实验一 应用心内电生理技术研究兔心房快速起搏对心房AERP和MAP的影响
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学处理
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 实验二 应用MEA技术研究兔RAP对右心耳和肺静脉场电位时程的影响及药物干预作用
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 小结
• 第二部分 24小时快速起搏兔右心房致右心耳和肺静脉结构重构的研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 小结
• 第三部分 24小时快速起搏兔右心房致右心耳和肺静脉神经重构的研究
• 1. 资料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计学方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表的学术论文
• 个人简历
• 导师评阅表