论文摘要
第一部分:新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的分离、培养、纯化与生物学特性的研究目的:探讨新生2天大鼠嗅球OECs分离培养和纯化方法,并观察其形态学变化及免疫细胞化学特性。方法:采用原代培养技术,从新生2天大鼠的嗅球分离培养OECs,用差速贴壁+化学药物等方法纯化培养OECs,倒置相差显微镜下观察OECs形态变化特点及生长情况,采用NGFRp75抗体行免疫细胞化学染色,根据NGFR p75免疫细胞化学染色结果统计培养的OECs的纯度。结果:体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三极细胞,其突起细长。未经纯化则成纤维细胞生长迅速7天后明显占据优势,而三种纯化方法中差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法的纯化效率高于其他两种。免疫细胞化学染色显示,培养的新生大鼠嗅球OECs呈现NGFRp75染色阳性。结论:差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法是一种高效率的纯化培养嗅球OECs的方法。第二部分bFGF、BPE及Forskolin对嗅鞘细胞增殖的影响及量效关系的探讨目的:探讨牛垂体提取物、bFGF及Forskolin对嗅鞘细胞增殖的影响及剂量-效应关系,为OECs移植治疗SCI提供种子细胞。方法:采用原代培养技术,从新生大鼠的嗅球分离培养OECs,并用差速贴壁+化学药物+胰酶快速消化法纯化培养OECs,添加牛垂体提取物、bFGF及Forskolin三种促增殖因子以及因子组合。MTT法检测各组生长因子以及因子组合对嗅鞘细胞生长情况的影响。采用NGFRp75抗体行免疫细胞化学染色,根据NGFRp75免疫细胞化学染色结果统计培养的OECs的纯度,并计算OECs的增值率。结果:OECs原代培养并纯化后添加牛垂体提取物后具有促进OECs增殖的效应,但未见典型的剂量-效应关系;添加bFGF后具有促进OECs增殖的效应,且呈现典型的剂量-效应关系;添加Forskolin后并不具有促进OECs增殖的效应。合理应用不同浓度的bFGF与Forskolin进行联合刺激,能有效促进细胞的增殖。结论:序贯的使用合适浓度的生长因子组合,将是有效促进嗅鞘细胞增殖的合理策略,有助于解决SCI治疗中种子细胞来源不足这一问题。
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标签：嗅鞘细胞论文; 细胞培养论文; 生物学特性论文; 碱性成纤维细胞生长因子论文; 增殖论文;