论文摘要
第一部分 TNF-α诱导HaCat细胞凋亡及PPARβ的活化 目的：探讨TNF-α导致HaCat细胞凋亡中，TNF-α对PPAR β表达时空和转录活性的影响。 方法：采用Hoechst 33258染色后观察凋亡细胞的形态学改变，并计算凋亡细胞百分率，利用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-3，8，9的活性变化，MTT染色检测细胞的成活率，RT-PCR和Western-blot观察TNF-α导致PPAR β mRNA及其蛋白的改变，应用凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析TNF-α介导PPAR β的DNA结合活性及转录活性的改变。 结果：Hoechst 33258染色显示，HaCat细胞经TNF-α（10ng／mL）分别处理12h和24h后，细胞出现明显凋亡，形态学表现为细胞体积缩小，核固缩，镜下为浓染致密的颗粒块状荧光；HaCat细胞分别经5、10、20ng／mLTNF-α处理24h后，随TNF-α处理剂量的增加，凋亡细胞数增多，HaCat细胞经TNF-α处理6h后，Caspase-3，8，9的活性增加，细胞成活率降低。Western-blot显示：HaCat细胞经TNF-α处理6、12h后PPAR β的蛋白表达显著增加，HaCat细胞经不同浓度的TNF-α处理24h后PPAR β蛋白表达水平都增加；RT-PCR检测示TNF-α处理3、6h后PPAR β mRNA的表达增强。凝胶迁移滞留实验分析及荧光素酶报道基因分析表明TNF-α可以增强PPAR β的DNA的结合活性和转录活性。 结论：TNF-α可诱导HaCat细胞发生凋亡，TNF-α可增强PPARβ mRNA、蛋白水平的表达以及DNA结合活性和转录活性
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