胎猪卵巢发育早期细胞凋亡的研究

论文摘要

细胞凋亡（apoptosis）对多细胞生物个体的发育、正常细胞更新、各组织保持正常结构与功能有着积极而重要的意义。卵母细胞的发生是胚胎发育过程中的重要事件,卵母细胞发生时,即使是在生理条件下,也不是所有卵原细胞都发育到减数分裂阶段,绝大部分经凋亡后闭锁退化。就是那些启动减数分裂的卵母细胞,也有相当数量在发育着的卵泡中凋亡（闭锁）。母猪妊娠后33-61d是卵母细胞发生关键时期,为阐明在卵母细胞发生中细胞凋亡情况及变化特点,本实验以猪胎儿为研究对象,利用荧光染色的方法,首次测定了猪卵巢发生过程中卵原细胞和颗粒细胞的凋亡情况;并利用免疫组织化学方法检测了细胞凋亡影响因子Bax和Bcl-2蛋白分布情况。结果表明:（1）妊娠33d时,胎猪卵巢上即可见原始生殖细胞和卵原细胞的凋亡,随着妊娠时间的延长,卵原细胞的凋亡率也逐渐增加,妊娠33d、40d、47d、54d和61d母猪胎儿卵巢上卵原细胞的凋亡率分别为3.13%、4.32%、5.50%、9.43%和11.10%,颗粒细胞的凋亡率则分别为8.89%、12.45%、14.74%、17.96%和22.81%;（2）Bax在各个时期卵巢表面上皮细胞、卵原细胞、卵母细胞、固缩坏死的卵原细胞和卵母细胞及血管内皮细胞都有表达,54d时阳性染色较强,各时期固缩,退化或消失的卵原细胞或卵母细胞Bax表达很强;Bcl-2在各个时期卵巢表面卵原细胞、卵母细胞、固缩坏死的卵原细胞和卵母细胞及血管内皮细胞都有表达,61d时阳性染色较强,各时期固缩,退化或消失的卵原细胞或卵母细胞Bcl-2表达很强,特别在共质体上表达最强。以上结果表明,在猪卵母细胞发生早期,即开始发生了卵原细胞和颗粒细胞的凋亡,且比率逐渐增加。并且在此过程中,Bax和Bcl-2蛋白均有表达,它们可能共同参与了卵巢中细胞凋亡的调节。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 插图和附表清单
• 缩略词
• 文献综述
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 卵巢
• 1.1.2 主要仪器和设备
• 1.1.3 主要试剂
• 1.1.4 试剂配制方法
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 石蜡切片的制作
• 1.2.2 卵巢切片的组织学染色
• 1.2.3 卵巢切片荧光染色
• 1.2.4 凋亡细胞的判定
• 1.2.5 卵巢切片的免疫组织化学染色
• 1.2.6 试验设计
• 1.2.7 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 卵巢切片荧光染色
• 2.1.1 卵原细胞凋亡率
• 2.1.2 颗粒细胞凋亡率
• 2.2 Bax和Bcl-2的免疫组化定位
• 2.2.1 Bax的免疫组化定位
• 2.2.2 Bcl-2的免疫组化定位
• 3 讨论
• 3.1 卵巢中的细胞凋亡
• 3.2 Bax免疫组化定位
• 3.3 Bcl-2的免疫组化定位
• 3.4 胎猪卵巢上细胞凋亡的机制
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介