东北林蛙皮肤活性肽制备及抗氧化活性的研究

论文摘要

生物活性肽是重要的生物活性物质,在自然界中广泛存在。随着对肽类不断深入的研究以及更多具有生物活性的肽类物质被发现,其所具有的生理生化功能也越来越为人们所认识,如抗菌作用、抗病毒作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、抗衰老作用以及调节免疫活性作用等等。目前,国内外对生物活性肽的研究兴趣越来越浓厚,已经形成一个新的研究领域,必将对医药和保健品的综合开发有深远的意义和广阔的应用前景。本研究以林蛙蛙皮为原料,采用现代酶工程技术制备林蛙皮生物活性肽,通过凝胶色谱层析、Tricine-SDS-PAGE电泳及高效液相等手段对酶解产物进行分离纯化,检测了林蛙皮肤活性肽的抗氧化活性,包括清除DPPH·、O2-·、·OH自由基的能力,探索了林蛙皮肤活性肽的分离纯化条件,初步探讨了林蛙皮肤活性肽的抗氧化活性。

论文目录

• 内容提要
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写词
• 第1章 绪论
• 1.1 研究背景
• 1.2 生物活性肽的概述
• 1.2.1 生物活性肽的概念
• 1.2.2 生物活性肽的分类
• 1.2.3 生物活性肽的功能
• 1.2.4 生物活性肽的制备方法
• 1.2.5 生物活性肽的应用前景
• 1.3 林蛙的研究和利用现况
• 1.3.1 蛙皮活性肽的特点及研究现况
• 1.3.2 国外研究现况
• 1.3.3 国内研究现况
• 1.4 研究目标
• 第2章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 主要试剂、仪器
• 2.2.1 试剂
• 2.2.2 主要仪器
• 2.2.3 主要试液的配制
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 林蛙皮活性肽制备工艺
• 2.3.2 蛋白酶活力测定
• 2.3.3 成分测定方法
• 2.3.4 木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽的影响因素及工艺优化
• 2.3.5 胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽的影响因素及工艺优化
• 2.3.6 复合酶制备林蛙皮肤活性肽的影响因素及工艺优化
• 2.3.7 蛋白浓度测定
• 2.3.8 木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽的分离纯化
• 2.3.9 木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽的体外抗氧化活性检测
• 2.4 数据处理及结果判断
• 第3章 结果
• 3.1 蛋白酶的酶活测定
• 3.1.1 标准曲线绘制
• 3.1.2 酶活测定
• 3.2 木瓜蛋白酶水解制备林蛙皮肤活性肽的影响因素及工艺优化
• 3.2.1 固液比对木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.2.2 酶用量对木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.2.3 pH 对木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.2.4 水解温度对木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.2.5 水解时间对木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.2.6 木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽正交试验结果
• 3.3 胰蛋白酶水解制备林蛙皮肤活性肽的影响因素及工艺优化
• 3.3.1 固液比对胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.3.2 酶用量对胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.3.3 水解温度对胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.3.4 pH 对胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.3.5 水解时间对胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽水解度的影响
• 3.3.6 胰蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽正交试验结果
• 3.4 复合酶水解制备林蛙皮肤活性肽的影响因素及工艺优化
• 3.4.1 固液比对水解度的影响
• 3.4.2 酶用量对水解度的影响
• 3.4.3 水解温度对水解度的影响
• 3.4.4 pH 对水解度的影响
• 3.4.5 水解时间对水解度的影响
• 3.4.6 正交优化试验
• 3.5 三种方法制备东北林蛙皮活性肽的比较
• 3.6 木瓜蛋白酶制备林蛙皮肤活性肽的分离纯化
• 3.6.1 粗提物的分离
• 3.6.2 紫外扫描测定
• 3.6.3 Tricine-SDS-PAGE 电泳
• 3.7 体外抗氧化活性测定结果
• 3.7.1 DPPH·清除能力
• 2-·清除能力'>3.7.2 O^2-·清除能力
• 3.7.3 ·OH 清除能力
• 第4章 讨论
• 4.1 林蛙皮的预处理
• 4.2 酶解制备活性肽
• 4.3 林蛙皮活性肽的分离与纯化
• 4.4 活性肽抗氧化活性
• 第5章 结论
• 参考文献
• 致谢