TCDCA抗炎免疫药理学及药代动力学研究

论文摘要

本文对牛磺鹅去氧胆酸（Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA）的抗炎作用机理、免疫药理学及药代动力学进行了研究。TCDCA抗炎作用机理研究采用Freund’s完全佐剂诱导Wistar大鼠AA动物模型,经灌胃给药后,测量致炎前和致炎后不同时期大鼠足跖肿胀度,并采用荧光分光光度法和ELISA双抗夹心法分别检测AA大鼠外周血中NO、LTB4及IL-1β、IL-6、TNF-α含量。试验结果表明,TCDCA连续给药21d,可显著抑制AA大鼠不同时期的足跖肿胀,显著降低血清中NO水平,显著提高血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量;TCDCA连续给药4d,可显著降低外周血中LTB4含量。因此,TCDCA的抗炎作用与其抑制LTB4和NO产生有关。TCDCA免疫药理学研究采用重量法测定正常小鼠和AA大鼠胸腺指数、脾指数;采用血清溶血素分光光度法测定了小鼠血清中溶血素含量,比浊法测定了AA大鼠血清中IgG含量,流式细胞术双抗标记法测定了小鼠外周血中CD4+、CD8+和CD19+淋巴细胞百分含量,迟发型变态反应法测定了小鼠耳壳肿胀度,碳廓清法测定了小鼠外周血中单核—巨噬细胞吞噬功能,比浊法测定了小鼠血清中溶菌酶含量以及ELISA双抗夹心法测定了AA大鼠外周血GM-CSF含量。试验结果表明,TCDCA可显著抑制正常小鼠和AA大鼠免疫器官重量,提高小鼠血清溶血素含量,降低AA大鼠外周血中IgG含量,提高小鼠外周血中CD4+、CD19+细胞百分率及CD4+∕CD8+比值,抑制小鼠迟发型变态反应,增强小鼠外周血中单核—巨噬细胞吞噬功能和提高小鼠血清中溶菌酶含量;TCDCA连续给药4d,可显著提高AA大鼠血清中GM-CSF的含量。因此,TCDCA对机体的免疫功能具有调节作用。TCDCA在大鼠体内的药代动力学研究采用薄层扫描法（TLC）。固定相为薄层层析用硅胶G;流动相为氯仿:异丙醇:36%乙酸:水（30:30:4:1 v/v/v/v）;显色剂为3.5%磷钼酸和20%硫酸;可见光检测,λs=528nm,λm=620nm的条件下,测定了大鼠口服TCDCA后的血中浓度及药代动力学参数。试验结果表明,TCDCA在血清中2.5～25μg/ml浓度范围内呈良好线性关系,相关系数达0.9993,平均回收率为99.38%,相对标准偏差（RSD）为2.42%,TCDCA最低检测限为50ng,最低检出浓度为2μg/ml,日间RSD均小于10.0%。按0.2g/kg·b·w大鼠单剂量一次灌胃TCDCA,用薄层扫描法测定了给药后不同时间血清中TCDCA的浓度,经DAS ver1.0药代动力学软件处理数据。结果表明, TCDCA在大鼠体内的药代动力学特征符合有吸收一室模型,其药代动力学方程为C= 20.161 （e-0.053t-e-2.996t）,药代动力学参数为Tmax 6.0h,Cmax 23.356mg/L,T1/2α13.010h,T1/2kα0.231h,Ka 2.996h-1,ke 0.053h-1,CL/F 0.529 L/h/kg,AUC 302.390 mg/L*h,Vd/F 9.920 L/kg。由此表明,TCDCA灌服后,具有吸收快、消除慢、滞留时间长的特点。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 选题的依据和意义
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 TCDCA 的研究概况
• 1.2.1.1 TCDCA 的理化性质
• 1.2.1.2 从鸡胆汁中提取 TCDCA 的工艺学研究
• 1.2.1.3 TCDCA 的药效学研究
• 1.2.1.4 TCDCA 的毒理学研究
• 1.2.1.5 TCDCA 的研究展望
• 1.2.2 中药及其提取物抗炎免疫药理研究进展
• 1.2.2.1 抗炎免疫中药的分类
• 1.2.2.2 抗炎免疫中药的作用机制
• 1.2.2.3 抗炎免疫中药的作用
• 1.2.2.4 抗炎免疫中药在兽医临床上的应用
• 1.2.2.5 抗炎免疫药理实验方法学进展
• 1.2.2.6 抗炎免疫药物的筛选方法进展
• 1.2.3 兽用中药及其有效成分的药代动力学研究进展
• 1.2.3.1 研究概况
• 1.2.3.2 中药及其有效成分的药代动力学研究方法概述
• 1.2.3.3 开展兽用中药及其有效成分药代动力研究的必要性
• 2 实验部分
• 2.1 TCDCA 抗炎作用机理研究
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.1.1 试验动物
• 2.1.1.2 药品
• 2.1.1.3 试剂
• 2.1.1.4 仪器
• 2.1.2 数据处理
• 2.1.3 试验方法
• 2.1.3.1 AA 大鼠外周血中NO 活性的测定
• 2.1.3.2 AA 大鼠外周血中 LT84 活性的测定
• 2.1.3.3 AA 大鼠外周血中 IL-1β、IL-6、TNF-α含量的测定
• 2.1.4 试验结果
• 2.1.4.1 TCDCA 对 AA 大鼠不同时期炎症的影响
• 2.1.4.2 TCDCA 对 AA 大鼠外周血中 NO 活性的影响
• 2.1.4.3 TCDCA 对 AA 大鼠外周血中 LT84 活性的影响
• 2.1.4.4 TCDCA 对 AA 大鼠中 IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响
• 2.1.5 讨论
• 2.1.6 小结
• 2.2 TCDCA 免疫药理学研究
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.1.1 试验动物
• 2.2.1.2 药品
• 2.2.1.3 试剂
• 2.2.1.4 菌种
• 2.2.1.5 仪器
• 2.2.2 数据处理
• 2.2.3 试验方法
• 2.2.3.1 机体免疫器官重量的测定
• 2.2.3.2 小鼠血清中抗体水平的测定
• 2.2.3.3 AA 大鼠外周血中 IgG 含量的测定
• +、CD8⁺和 CD19⁺淋巴细胞含量的测定'>2.2.3.4 小鼠外周血中 CD4⁺、CD8⁺和 CD19⁺淋巴细胞含量的测定
• 2.2.3.5 小鼠迟发型变态（DTH）反应的测定
• 2.2.3.6 小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的测定
• 2.2.3.7 小鼠血清中溶菌酶含量的测定
• 2.2.3.8 AA 大鼠外周血中 GM-CSF 含量的测定
• 2.2.4 试验结果
• 2.2.4.1 TCDCA 对机体免疫器官重量的影响
• 2.2.4.2 TCDCA 对特异性体液免疫功能的影响
• 2.2.4.3 TCDCA 对特异性细胞免疫功能的影响
• 2.2.4.4 TCDCA 对非特异性免疫功能的影响
• 2.2.4.5 TCDCA 对AA 大鼠外周血中 GM-CSF 含量的影响
• 2.2.5 讨论
• 2.2.6 小结
• 2.3 TCDCA 在大鼠体内的药代动力学研究
• 2.3.1 试验材料
• 2.3.1.1 试验动物
• 2.3.1.2 药品
• 2.3.1.3 试剂
• 2.3.1.4 仪器
• 2.3.2 数据处理
• 2.3.3 试验方法
• 2.3.3.1 试验条件的选择
• 2.3.3.2 血清样品处理方法
• 2.3.3.3 TCDCA 标准曲线的制备及回收率的测定
• 2.3.3.4 方法学考察
• 2.3.3.5 大鼠口服 TCDCA 后的药代动力学研究
• 2.3.4 试验结果
• 2.3.4.1 方法学研究
• 2.3.4.2 标准曲线
• 2.3.4.3 回收率的测定
• 2.3.4.4 精密度试验
• 2.3.4.5 稳定性试验
• 2.3.4.6 大鼠口服 TCDCA 后的药代动力学研究
• 2.3.5 讨论
• 2.3.6 小结
• 3 全文总结
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介