奶牛L-选择素McAb的制备及在乳腺炎奶牛中性粒细胞表达规律的研究

论文摘要

本实验用高纯度高活性的奶牛外周血中性粒细胞免疫BalB/c小鼠,同时利用L-选择素纯品作为检测抗原进行筛选,采用杂交瘤建株技术,共获得3株能稳定分泌抗奶牛L-选择素（CD62L）的单克隆抗体杂交瘤细胞株1F6、3C2和4H3。在对所获单克隆抗体的效价、亲和力、抗原识别表位和识别抗原特性等进行细致分析的基础上,选择了效价高且亲和力好的4H3单克隆抗体细胞株,采用间接免疫荧光技术及免疫胶体金技术,通过流式细胞仪和低压扫描电子显微镜,检测了在生理状态与乳腺炎病理状态下奶牛中性粒细胞CD62L的表达规律。结果表明:乳腺炎病理状态下的奶牛中性粒细胞CD62L高度表达。这为研制治疗奶牛乳腺炎的新型药物提供了重要的理论依据。

论文目录

• 内容提要
• 绪论
• 第一篇 文献综述
• 第一章 中性粒细胞免疫功能的研究进展
• 1 中性粒细胞的发育分化
• 2 中性粒细胞与先天免疫
• 3 中性粒细胞功能的调节
• 4 中性粒细胞介导炎症与粘附分子之间的关系
• 5 中性粒细胞凋亡
• 6 中性粒细胞免疫功能实验方法的研究
• 第二章 奶牛乳腺的防御机制与乳腺炎病理学
• 1 乳头管的屏障作用
• 2 乳腺的免疫应答反应
• 3 免疫细胞的趋化性、吞噬和杀细菌作用
• 4 其它可溶性因子
• 5 围产期奶牛乳腺炎
• 6 免疫抑制与乳腺炎的发病机理
• 7 牛奶体细胞计数水平和临床性乳腺炎
• 8 讨论和结论
• 第二篇 研究内容
• 第一章 L-选择素单克隆抗体的制备
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 获得高纯度高活性的奶牛中性粒细胞
• 2.2 免疫小鼠血清抗体效价
• 2.3 细胞融合、筛选和克隆
• 3 讨论
• 3.1 关于中性粒细胞的分离方法
• 3.2 关于免疫方案
• 3.3 关于细胞融合
• 3.4 克隆和筛选
• 3.5 影响腹水产量的因素
• 4 小结
• 第二章 L-选择素单克隆抗体的生物学特性鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 杂交瘤细胞培养上清及腹水效价
• 2.2 腹水蛋白含量测定
• 2.3 腹水中有效抗体浓度测定
• 2.4 单抗亚类鉴定
• 2.5 杂交瘤细胞染色体众数
• 2.6 三株单克隆抗体纯化后的SDS-PAGE 电泳结果
• 2.7 单抗亲和力常数测定
• 2.8 单克隆抗体的抗原识别位点分析
• 2.9 单克隆抗体识别抗原特性
• 3 讨论
• 3.1 单抗纯化
• 3.2 腹水中抗体蛋白含量
• 3.3 单抗亲和力
• 4 小结
• 第三章 乳腺炎奶牛中性粒细胞L-选择素表达活性的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 CD62L 在奶牛PMN 表达的流式细胞仪检测结果
• 2.2 CD62L 在奶牛PMN 分布的低压扫描电镜观察结果
• 3 讨论
• 3.1 CD62L 在PMN 表达的动态变化
• 3.2 CD62L 的表达与炎性反应的相关性
• 3.3 PMN 表面脊样结构的分布及密度与乳腺炎性反应的相性
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介