大鼠肝细胞GnRH受体的表达及其影响的研究

论文摘要

许多研究已经证明促性腺激素释放激素及其受体存在于下丘脑-垂体轴以外的器官和组织,例如胎盘滋养层细胞、前列腺、胰腺及一些肿瘤组织中[1.2.3]。Chegini等[4]首次证明了子宫平滑肌细胞上存在GnRH及其受体的mRNA。我们先前的研究也报道了胃肠胰系统能自身合成GnRH[5],而且证实胃肠胰系统及甲状腺均含有GnRH受体免疫反应阳性物质[6.7]。GnRH在下丘脑-脑垂体轴外生成的同时,其亦发挥生物学效应,Gurrie等[8]发现GnRH可以使胎盘滋养层细胞内[Ca2+]明显升高,进而参与细胞内的信号传递过程。Tache等[9]发现脑室及静脉注射GnRH类似物后,胃液的pH值升高,其作用机制可能是GnRH类似物通过抑制迷走神经而发挥间接的调节作用。近年来在临床上观察到药理剂量的GnRH类似物可导致糖代谢紊乱,但其发生机制尚不明确,有人认为可能与使用GnRH类似物时机体的性激素改变有关;GnRH对葡萄糖代谢是否存在直接作用未见报道。肝脏是物质代谢的主要器官,同时胃肠胰系统能自身合成GnRH,因此,肝脏细胞是否存在GnRH受体,GnRH是否在GnRH受体介导下对肝糖代谢产生影响是值得关注的问题。研究方法:取大鼠肝脏组织制成切片,运用免疫组织化学SABC法和原位杂交技术,观察大鼠肝脏细胞是否存在GnRH受体;用原代培养法培养大鼠肝细胞,GnRH受体免疫组化、糖原染色比较不同浓度葡萄糖培养液对GnRH受体表达的影响。研究结果:（1）:大鼠肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性反应物质分布在细胞的细胞膜和细胞浆中,细胞核呈阴性反应。一个肝小叶内,靠近中央静脉的肝细胞,其GnRH受体免疫反应较强,着色较深,远离中央静脉的肝细胞,其GnRH受体的免疫反应较弱,着色较浅。（2）:大鼠肝细胞GnRH受体的mRNA杂交信号物质呈深棕色,背景不着色,反差明显。信号物质分布于细胞质,细胞核未检测到GnRH受体mRNA杂交信号,呈阴性反应。一个肝小叶内,靠近中央静脉的肝细胞,其GnRH受体mRNA杂交信号较强,着色较深,远离中央静脉的肝细胞,其GnRH受体mRNA杂交信号较弱,着色较浅。（3）:用SABC免疫组织化学染色法分别对葡萄糖浓度1g/L、葡萄糖浓度2g/L培养液培养的大鼠肝细胞行GnRH受体的免疫组织化学染色;镜下观察两种葡萄糖浓度培养液培养条件下GnRH受体的表达,用图像分析软件对其进行光密度值分析,结果显示正常葡萄糖浓度（1g/L）培养时肝细胞GnRH受体的表达强度明显高于高糖培养液（2g/L）中肝细胞的表达（P<0.01）。结论:（1）大鼠肝细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,又有GnRH受体mRNA杂交信号,说明大鼠肝脏在转录和翻译水平能自身合成GnRH受体,同时此部位GnRH受体的分布具有中央静脉旁肝细胞增多的特点。（2）GnRH受体的表达强度与细胞外液葡萄糖浓度有关,表现为正常葡萄糖浓度培养时肝细胞GnRH受体表达强度明显高于高糖浓度培养,说明高浓度葡萄糖使肝细胞GnRH受体表达下调,提示肠胰系统产生的GnRH可能通过其在肝细胞上的受体调节糖代谢。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 第一部分 促性腺激素释放激素及其受体的相关研究
• 第二部分 肝脏在糖尿病发病中的地位
• 第三部分 促性腺激素释放激素类似物引起的高血糖
• 正文
• 实验一 大鼠肝脏促性腺激素释放激素受体的定位研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 高浓度葡萄糖培养液对大鼠肝细胞GnRH 受体表达的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢